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八肽胆囊收缩素对脂多糖诱导离体兔肺动脉反应性变化的影响 |
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血管反应性影响的作用机制尚不清楚。本实验应用离体动脉环技术，观察八肽胆囊收缩素(CCK-8)对内毒素引起肺动脉反应性变化的影响，以探讨CCK缓解内毒素休克时肺动脉压增高的作用机制。
材料与方法
一、材料：
脂多糖(E. coli. lipopolysaccharide, LPS)，八肽胆囊收缩素(CCK-8)，氯化乙酰胆碱(ACh)，消炎痛均为Sigma产品；苯肾上腺素(phenylephrine，PE)购于上海天丰制药厂；RPMI-1640购于邦定公司；其余试剂均系国产分析纯。
二、实验程序：
1.离体肺动脉环的制备 日本大耳白兔12只，雄雌不拘，体重2.1～2.6 kg。实验前禁食18 h，自由饮水。25%乌拉坦腹腔注射麻醉后放血处死。迅速联合摘取心肺，在预冷的Krebs液中，分离两侧近端的肺动脉，剔除外膜粘附的结缔组织，避免损伤动脉内皮细胞，剪制成3 mm长血管环。Krebs液成分(mmol/L)：NaCl 118，KCl 4.7, MgSO4 1.2, KH2PO4 1.2, NaHCO3 25, CaCl2 2.5,葡萄糖11.1, (pH=7.4)。
2.实验分组 LPS组(n=10)、LPS+CCK-8 0.1 μg/mL组(n=10)、LPS+CCK-8 0.5 μg/mL组(n=8)、CCK-8 0.5 μg/mL组(n=8)及溶剂对照组(n=13)。将肺动脉环置于RPMI-1640培养液(溶剂)中，每2 mL培养液中置2个环，分别用4 μg/mL LPS、或加0.1 μg/mL、0.5 μg/mL CCK-8，单用0.5 μg/mL CCK-8或溶剂，在37℃、含5% CO2的潮湿环境中(CO2孵箱)孵育2 h。
3.肺动脉环张力检测 把预处理的肺动脉环垂直挂于夹层器官槽中，一端固定于槽底部，一端通过张力传感器(T-1型)与3066型平台记录仪(四川仪表总厂)相连。糟中通有37℃恒温含10-5 mol/L消炎痛Krebs液，并持续充入95% O2-5% CO2混合气体。血管静息张力为2 g，平衡1 h，每15 min换液1次。平台记录仪描记血管环张力变化。PE 10-6 mol/L预收缩肺动脉至平台，Krebs液冲洗至基线，以稳定肺动脉的反应性。然后观察肺动脉对PE 10-6 mol/L、ACh 10-6 mol/L的反应性变化。实验结束后，留取肺动脉，烘烤至恒重，以标化张力。收缩反应变化用克.张力/毫克环干重(g tension/mg dw)表示。舒张反应变化用g tension/mg dw和舒张张力占同组PE收缩张力的百分比表示。
三、统计处理：
实验数据为均值±标准差()。差异显著性用多样本均数t检验判断。
结果
一、对肺动脉收缩反应的影响：
溶剂组收缩张力为(1.77±0.31) g tension/mg dw；LPS组为(2.50±0.66) g tension/mg dw，显著高于溶剂组(P＜0.01)。CCK-8(0.1，0.5 μg/mL)与LPS共同孵育后，肺动脉对PE的收缩反应张力分别为(1.78±0.34) g tension/mg dw和(1.77±0.24) g tension/mg dw，显著低于LPS组(P＜0.01)(图1，2)。
Fig 1 Representative tracings of isometric contractile responses to PE and relaxation responses to ACh of rabbit pulmonary artery pre-incubated with vehicle(A), LPS(B), LPS+CCK-8 0.1 μg/mL(C), LPS+CCK-8 0.5 μg/mL(D).
图1 兔离体肺动脉环预处理后对PE的收缩反应和ACh的舒张反应的典型原始图
Fig 2 CCK-8 reversed enhancement of contractile response of pulmonary artery induced by LPS to PE.. **P＜0.01, vs vehicle group ##P＜0上一页 [1] [2] [3] 下一页
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