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海马内微量注射硫酸镁对马桑内酯诱发大鼠痫样放电的影响 |
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硫酸镁对致痫动物大脑皮层和海马异常放电的影响。
材料和方法
成年Wistar大鼠,体重200～250 g，雌雄不拘，由同济医科大学实验动物中心提供，用水合氯醛(0.4g.kg-1,ip)麻醉。分离一侧坐骨神经，用37℃～38℃液体石蜡棉球浸润以备刺激，用脑立体定位仪（江湾Ⅰ型，第二军医大学生产）固定大鼠头部，以前囟后2.5 mm，中线旁开2.5 mm为中心，去除颅骨5 mm×5 mm,保留硬脑膜, 在此区贴敷浸有浓度为5×10-4 mol.L-1的CL(华西医科大学制药厂生产)滤纸(2 mm×2 mm)造成大鼠急性致痫模型。
一、皮层、海马诱发电位的记录及海马内微量注射方法：
用银-氯化银乏极化电极作为引导电极,信号经XJ5850(上海无线电二十一厂)生理前置放大器放大后输入计算机生理信号处理系统（南京医科大学研制）进行平均叠加(采样间隔36 ms，加叠次数50，采样点数8192)，用恒流电子刺激器（日本光电公司产品）通过SS-20IJ隔离器电刺激一侧坐骨神经(1Hz，5V, 0.3 ms)，引导对侧体感皮层(前囟后1.0 mm，中线旁开1.0 mm)或海马CA2区(前囟后3.2 mm，中线旁开2.5 mm，距皮层表面深3.0 mm)的平均诱发电位。用三羟甲基氨基甲烷，将硫酸镁注射液(上海海普制药厂)pH值调整到7.2～7.4，在皮层应用CL 10 min后于海马CA2区注射25％的硫酸镁2 μL，注药时间1 min。用日本光电RM-6000多导生理记录仪记录ECoG。
二、皮层、海马细胞外钙离子浓度的检测方法：
将铝硅玻璃管（外径为1.5mm，内径为1.0mm）经铬酸洗液清洁，浸入二次去离子水中，烘干后用中山大学科教仪器厂生产的B-80型玻璃微电极拉制器，将玻璃细胚拉制成尖端直径为1 μm的玻璃微电极，采用背面灌注法，将中性载体Ca2+交换剂ETH1001(Fluka公司产品)充灌于玻璃微电极尖端，玻管内充液为10 mmol.L-1的CaCl2溶液，制备的Ca2+-ISE在含有10-8～10-3mol/L的Ca2+标准缓冲液中进行校正。Ca2+浓度在10-3～10-5mol/L之间，每10倍变化，Ca2+-ISE检测电位变化大于20 mV，Ca2+-ISE对Ca2+浓度响应时间小于1 s。将Ca2+－ISE置于海马CA2区或皮层感觉运动区(前囟后1 mm,中线旁开1.0 mm，皮层下100 μm以内),检测信号输入ISE-1型离子计(上海生理研究所)，连续记录皮层和海马在致痫前后的电位值，绘制Ca2+浓度值与相应电位值标准曲线，该曲线呈良好的线性关系。由该曲线得出致痫前后大脑皮层、海马细胞外Ca2+浓度变化值。每次实验前后均对电极进行校正。
结果
一、CL致痫时皮层、海马细胞外Ca2+浓度的变化：
大脑皮层应用CL前和应用CL之后5～10 min，Ca2+-ISE检测大脑皮层电位差值为(2.44±0.92) mV，检测到海马CA2区电位差值为(2.59±1.28) mV，应用生理盐水前后检测到大脑皮层和海马电位差值分别为(0.17±0.03) mV和(0.19±0.02) mV，根据上述标准曲线求得致痫时皮层及海马细胞外Ca2+浓度的变化,并与应用生理盐水进行比较(见表1)，结果有显著差异。
表1 CL致痫时大脑皮层和海马细胞外［Ca2+］的变化
Tab 1 The changes of ［Ca2+］o in cerebral cortex (C) and hippocampus
(H) after application of CL and normal salt (NS)()
Section n Potential difference
(mV) ［Ca2+］oreduction
(mmol.L-1)
CL C 20 2.44±0.92 0.61**
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