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慢性多相性应激对老龄鼠心肌脂质过氧化和超微结构的影响 |
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ssed mice, however, such changes were not found. Conclusions: The effects of aging on lipid peroxidation formation and ultrastructure damage in mice myocardium can be aggravated by long term exposure of the animals to psychological stressors from their external environment.
【Key words】psychological stress aging myocardium lipid peroxidation ultrastructure▲
衰老与脂质过氧化作用关系密切，为数众多的实验依据表明：机体氧自由基的产生和清除失衡，导致生物膜脂质过氧化物积聚是组织细胞老化的重要原因之一［1］。业已发现，强烈的以体因为主的急性生理性应激源(如辐射、低温、缺血、高热等)可促进老年心肌脂质过氧化形成［2］，但迄今研究外界环境中以心因为主的慢性心理性应激源长期作用对老年心肌脂质过氧化损伤的报道尚很罕见。为此，本实验通过比较长期暴露于多相性心理应激源的老龄和青龄小鼠心肌中脂质过氧化物含量和抗氧化酶活性，检测心肌酶，并观察心肌超微结构，旨在探讨长期心理应激在老年心肌脂质过氧化损伤中的作用，为深化长期心理应激与心脏老化相互关系的认识提供参考性实验依据。
对象与方法
实验动物 40只昆明小鼠，由湖南医科大学实验动物中心提供，其中青龄鼠(1.5月龄，雌雄各半)20只，老龄鼠(15月龄，雌雄各半)20只，分别按性别和体重匹配后随机分入对照组10只和应激组10只，共4组。饲养在湖南医科大学第二附属医院实验动物室内，光照时间上午8点至下午8点，室温保持24℃，通风良好，喂以全价营养饲料，自由进食饮水，除以下实验应激外无其他不良刺激。
方法 1.慢性多相性应激源 参照Carter等［3］建立的慢性、多相性应激法，经改良后建立本实验的应激方法：(1)限制：将小鼠放入空底12cm×5cm×5cm铁盒内，置于栅板上，保证小鼠不受压，但运动受限，且无光源，限制刺激每周随机择时进行3次，每次30分钟；(2)旋转：自制旋转器，转速为33转/分，在此转速下离心力最小，旋转刺激每45～150分钟内进行1次，每次15分钟；(3)拥挤：标准小鼠笼，按应激组10只/笼，对照组5只/笼喂养。青、老龄鼠应激组给予以上应激，持续6周。
2.检测方法 应激实验6周后，全部实验鼠断头，钝性分离心脏，用预冷(4℃)生理盐水冲洗，滤纸吸净表面残液，(1)立即剖取部分心室肌组织按1∶10(W∶V=lg:10ml)加入预冷(4℃)匀浆液(0.15mmol/L磷酸盐缓冲液，PH7.4，含1mg/ml大豆胰蛋白酶抑制剂)，冰浴匀浆后部分分装，其余匀浆离心30分钟(4℃，14，000g)，取上清：采用TBA荧光比色法测心肌匀浆脂质过氧化物(LPO)含量，邻苯三酚自氧化法测心肌匀桨上清液超氧化物歧化酶(SOD)活性，DTNB法测心肌匀浆上清液谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性，Bradford法测定总蛋白质量，并在自动分析仪上以酶法测定心肌匀浆天门冬酸转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸磷酸激酶(CPK)活性；(2)从4组小鼠心尖部取1.0mm3的心肌组织块，以2.5%戊二醛固定，按透射电镜样本常规处理，制成厚度1.0μm的切片，在日立H-600型透射电镜下观察心肌细胞。
3.统计学处理 实验数据以x±s表示，显著性检验采用单因素方差分析，均数的两两比较采用q检验。
结果
一、各实验组心肌LPO含量和SOD、GSH-PX活性的比较
老龄对照鼠心肌LPO含量高于青龄对照鼠，SOD活性低于后者(P均＜0.05)，两者GSH-PX活性差异无显著性。慢性多相性应激后，青龄鼠心肌SOD活性增高(P＜0.05)，LPO含量有增高趋势，但无显著性；老龄鼠心肌LPO含量进一步增高，SOD、GSH-PX活性降低(均p＜0.05)见表1。
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