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维生素E C和 |
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【Key words】 DNA damage β-Carotene Vitamin E Vitamin C
为了深入了解维生素E、C（VE、VC）和β-胡萝卜素三种具有抗氧化作用的营养素在不同营养状况产生的抗氧化作用及降低机体细胞 DNA 损伤的效果以及探讨三种营养素的协同抗氧化作用机制，本研究抽取一定数量的正常人群进行维生素补充实验， 利用单细胞凝胶电泳
（SCGE），对淋巴细胞氧化损伤程度和机体内VE、C和β-胡萝卜素的营养状况进行检测和分析。
材料与方法
1．试剂：淋巴细胞培养液为含10%小牛血清的RPMI-1640培养液。 淋巴细胞分离液(1077) 由Sigma公司提供，低熔点和正常熔点琼脂糖均由英国Gibco BRL公司提供，冰冻玻片(frosted slide)来自Curtis Matheson科技公司， 荧光剂 DAPI(4′6-Diamidine-2′-phenylindole dihydrochl-oride)由 Boehringer Mannheim公司提供。
2．对象：选择50～59岁男性 100人，无癌症、心脏病、 糖尿病等病史，服用利尿剂也除外。所选对象随机分为两组， 一组为实验组（服药），另一组为对照组（未服药），每组各50人。实验组每人每天中午服用 1 丸（每丸25 mg）β－胡萝卜素、VC药片(每片100 mg)，VE胶丸(每丸280 mg)早饭后服下。 对照组服用外观相同的安慰剂。 实验期为20周，到试验结束为止，同时采集实验组和对照组的全血30 μl，分离淋巴细胞，然后进行DNA自发损伤和用H2O2处理后DNA损伤程度的分析，H2O2剂量分别为30 μmol/L，100 μmol/L, 300 μmol/L三个剂量组。
3．DNA损伤分析：单细胞凝胶电泳是一种敏感快速的DNA断裂损伤检测技术［1］。实验分析时，每种处理观察100个细胞，并计算细胞DNA损伤率。
4．血清维生素E、C和β-胡萝卜素水平分析：取受试者全血5 ml、2 000 g、4℃离心15分钟，收集血清并分装于1.5 ml的离心管中立即浸入液氮中冷冻，然后存放于-80℃冰箱内待测。血清中维生素C的测定［2］，α-生育酚和β-胡萝卜素的测定［3］均采用高效液相色谱法分析。
结果与分析
1．机体营养水平分析结果显示经过20周连续补充较高剂量的维生素E、C和β-胡萝卜素后，实验组人群血清中α-VE、VC的水平比对照组分别提高了38. 88%和60.12%，β-胡萝卜素水平比对照组提高了4.7倍(P值均小于0.01)，见表1。
表1 受试者血清维生素E、C和β-胡萝卜素的水平比较
维生素E β-胡萝卜素 维生素C
n (mmol/L) n (μg/ml) n (μmol/L)
对照组 41 4.63±0.36 35 0.29±0.06 48 33.15±6.78
实验组 39 6.43±0.34 39 1.65±0.37 46 53.08±3.09
P值 <0.01 <0.01 <0.01
2．DNA损伤分析：两组人群DNA自发性损伤均较低，实验组和对照组外周血淋巴细胞DNA损伤率分别为6.1%和6.8%，差异无明显性(P>0.05)。当实验组和对照组人群外周血淋巴细胞同时给予同等剂量H2O2处理后，可以看到H2O2剂量在30 μmol/L, 100 μmol/L, 300 μmol/L时，两组淋巴细胞DNA损伤均明显增加；而实验组人群DNA损伤率明显低于对照组，经统计学t检验，两组人群DNA损伤差异存在明显性（P<0.05, P<0.01, P<0.01),见表2。
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