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绿茶抑制血小板活化因子对神经细胞的损害 |
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韩恩吉1 韩雪飞2 Joseph Rajiv2
血小板活化因子(PAF)是一种内源性磷脂，除强烈地引起血小板活化外，还有很多生物学作用，其中包括中枢神经系统的毒性作用［1］。我们发现绿茶能抑制PAF对神经细胞的损害。
1.材料与方法：
(1)材料：除绿茶(金轮牌)系中国畜牧土杂产品进出口公司广东茶叶分公司生产外，其余各种设备和试剂皆由美国亨利福特医院(Henry Ford Hospital, Detroit)分子神经病学实验室提供。
(2)方法：①细胞培养：人类神经母细胞瘤细胞系列LaN1。②乳酸脱氢酶(LDH)［2］：利用比色法测量培养液中的LDH浓度，做为细胞损害的一项指标。③神经细胞胞浆钙离子测定［3］：神经细胞经过低渗处理后，导入水母发光蛋白，用血小板胞浆钙离子测定仪(Chrono Log, Haverston, PA)测量神经细胞胞浆钙离子浓度。④绿茶制备：20 g绿茶加入250 ml蒸馏水中煮沸10分钟，离心煎剂(1 000 g×15 min)，取上清液过滤后，烘干箱(80℃)内蒸发水分。4 ml生理盐水溶解蒸发后的剩余物，离心去除未溶解成分(5 000 g×1 min)。绿茶水溶液(5kg/L)贮存于-20℃冰箱中备用。实验前用生理盐水稀释成各种浓度：50 g/L，100 g/L，200 g/L，300 g/L。应用前离心(5 000 g×30 s)，以保证各种实验中应用相同的绿茶成分。细胞培养100 μl绿茶水溶液加入10 ml培养液中，胞浆钙离子测定10 μl绿茶水溶液加入1 ml标本中，绿茶最终浓度分别是0.5 g/L，1.0 g/L，2.0 g/L，3.0 g/L(此浓度低于饮用茶浓度)。
2.结果：
(1)绿茶抑制PAF对神经细胞的损害：实验组：应用绿茶0.5 g/L和1.0 g/L培养细胞10分钟，然后加入PAF(10 μmol/L)培养细胞6小时。对照组：先加入与绿茶等体积生理盐水(100 μl)10分钟，再加入PAF(10 μmol/L)培养细胞6小时。绿茶对神经细胞显示保护作用：①显微镜观察细胞形态：实验组损害程度明显轻于对照组。②LDH释放：实验组明显少于对照组。对照组(PAF)：52.1%±24.2%，实验组：A.绿茶0.5 g/L+PAF：31.3%±23.7%(P<0.1)，B.绿茶1.0 g/L+PAF：9.8%±8.0%(P<0.001)。(2)绿茶抑制PAF诱导的神经细胞胞浆钙离子升高，抑制作用随绿茶浓度升高而增强(附表)。
3.讨论：我们以形态学改变和LDH释放为指标证实了绿茶在一定浓度下(0.5 g/L和1.0 g/L)能对抗PAF对神经细胞的毒性作用，显示了绿茶对神经细胞的保护作用。虽然PAF引起神经细胞损害的机制还不十分清楚，但是过去的研究已经证实神经细胞膜上存在着PAF受体，PAF与其特异性受体相结合能引起胞浆钙离子升高，从而触发凋亡过程。本文中神经细胞胞浆钙离子测定不仅进一步证实了这一观点，而且初步揭示了绿茶对神经细胞保护作用与其能抑制PAF诱导的胞浆钙离子升高有关。由于PAF参与多种神经系统损害的病理过程如外伤、癫痫、脑血管病，本结果可能成为绿茶防治某些神经系统疾病的研究基础。绿茶对神经细胞的作用与浓度有很大关系，这与以往的报道是一致的。
参考文献
1 韩恩吉，徐从高. 血小板活化因子与缺血性脑血管病. 国外医学神经病学 神经外科学分册，1990，17(4)： 183-185.
2 Cabau PG, Wroblewski F. Colormetric measurement of lactic dehydrogenase activaty of body fluids. Am J Clin Pathol, 1958, 30: 234-236.
3 Josph R, Han E. Amyloid β-protein fragment 25-35 causes activation of cytoplasmic calcium in neurons. Biochem Biophys Res Commun, 1992, 184(3): 1441-1447.
附表 绿茶抑制PAF诱导的神经细胞胞浆钙离子升高(PAF浓度7 μmol/L，n=6)
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