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抗人M和N型GPA特异性单克隆抗体的制备和鉴定 |
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董燕 毛建平 刘斌 孙志贤
摘 要：目的：为了建立“血型糖蛋白A（Glycophorin A, GPA）突变分析”技术。方法：采用杂交瘤技术制备单克隆抗体（McAb）。结果：获得3株分泌抗GPA特异性McAb的杂交瘤细胞系，这3株McAb均属于IgG2a亚类、Kappa型轻链，其中2株特异性抗M型GPA，另外1株特异性抗N型GPA。3株McAb所针对的抗原决定簇位于GPA多肽链N末端第1～39位氨基酸之内，抗体与其结合依赖糖链的完整性。结论：制备的McAb可用于“GPA突变分析”的研究，也可以作为血型试剂在血液免疫学、遗传学和法医学的领域中应用。
关键词：MN血型 血型糖蛋白A 单克隆抗体
分类号：R392.11
Preparation and characterization of monoclonal antibodies to M- and N-forms of human glycophorin A
DONG Yan
（Institute of Radiation Medicine, Academy of Military Medical Sciences, Beijing 100850）
MAO Jian-Ping
（Institute of Radiation Medicine, Academy of Military Medical Sciences, Beijing 100850）
LIU Bin
（Institute of Radiation Medicine, Academy of Military Medical Sciences, Beijing 100850）
Abstract：Objective: To develop the “glycophorin A (GPA)somatic cell mutation assay”. Methods: Monoclonal antibodies (McAb) were prepared by hybridoma technique . Results: Three mouse monoclonal antibodies against human glycophorin A have been produced . They all belong to IgG2a subclass, Kappa type light chain. Two of them are specific for M form and one for N form GPA. They bind to determinants presented on the 1～39 amino acid N-terminal peptide of GPA, their binding depend on intact oligosaccharides. Conclusion: These antibodies is applicable for “GPA somatic cell mutation assay”, also useful in blood immunology, genetics and medical jurisprudence.
Key words：MN blood group Glycophorin A Monoclonal antibody▲
GPA是人红细胞膜表面主要糖蛋白，存在M和N 2种结构形式，是决定MN血型系统的抗原。近年发现，GPA在体细胞突变研究中是个有价值的分子标志，源于“GPA突变分析”技术的建立和应用［1］。该技术以不同荧光标记的抗GPA特异性单抗为主要检测试剂，结合流式细胞仪分析，检测人外周血中红细胞的变异频率［2，3］，并在生物剂量计和癌患风险评估方面得以应用，获得了较有意义的结果。我们制备了抗M和N型GPA的特异性McAb,以期“GPA突变分析”技术的建立和应用。
1 材料与方法
1.1 抗原 新鲜采取健康人O型红细胞，用血型试剂（长春博德生物技术有限公司）鉴定和筛选出OM和ON型红细胞。
1.2 动物免疫 经PBS洗涤和悬浮的OM和ON型红细胞，注射6～8周龄Balb/c小鼠腹腔，108细胞/只[1] [2] 下一页
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