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CD8 细胞免疫亲合柱的研制及条件探讨 |
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王郡甫 田志刚 张彩 刘金生 张建华 许晓群 孙 张捷
摘 要：目的：建立一种利用免疫亲合柱纯化细胞的方法。方法： 将亲合素交联于聚丙烯酰胺凝胶Bio-Gel上，制成免疫亲合柱；将外周血单个核细胞与生物素化抗CD8单克隆抗体作用后，加到该免疫亲合柱上进行纯化，CD8+细胞即吸附于柱上，洗去其他细胞后，得到纯化的CD8+细胞。结果：纯化后CD8+细胞纯度达56％～7l％，细胞回收率为39％～66％，台盼蓝染色法显示活细胞达98％。 结论：利用免疫亲合柱纯化细胞具有纯度高，回收率高，细胞活性好等优点，是一种方便有效的细胞纯化方法。
关键词：免疫亲合柱 CD8+细胞 细胞纯化 流式细胞仪
分类号：R392-33
The preparation of immunoaffinity column and the purification of CD8+ cells
WANG Jun-Fu
（Shandong Academy of Medical Sciences，Jinan 250062）
TIAN Zhi-Gang
（Shandong Academy of Medical Sciences，Jinan 250062）
ZHANG Cai
（Shandong Academy of Medical Sciences，Jinan 250062）
Abstract：Objective：To prepare immunoaffinity column for cell separation. Methods： Avidin was attached to Bio-Gel and columns packed with Avidin-conjugated Bio-Gel was prepared. Cells from human peripheral blood were incubated with biotinylated anti-CD8 monoclonal antibody and then applied to the column；Biotin-labeled target cells are captured on Avidin coated Bio-Gel beads and non-target cells were washed off .Bounded target cells were then released by gentle agitation. Results： CD8+cells were enriched with a purity of 56%～71％ and a recovery of 39%～66％；the percent of viable CD8+ cells were proved to be 98％ by Trypan Blue Staining． Conclusion： With an high purity and recovery,the immunoaffinity column can be used as an efficient method for cell isolation.
Key words：Immunoaffinity column CD8+ cells Cell separation Flow cytometry▲
有效地分离造血及免疫细胞（如造血干细胞，NK细胞等），是深入研究其发育，分化及功能的先决条件，同时也是进一步开发新型生物治疗方案的需要。为此，国外建立了免疫亲合柱纯化细胞的方法，其基本原理是利用亲合素交联的凝胶捕获生物素化单抗阳性细胞，去除非目的细胞。此方法不仅细胞纯度高，回收率好，且操作简便易行［1］。而国内尚未建立类似的技术。本文参考国外相关文献制备了免疫亲合柱，并利用该柱进行了CD8+细胞的纯化，获得较满意的结果。
1 材料与方法
1.1 主要试剂及仪器 亲合素（Avidin，12 U/mg），生物素化N-羟基琥珀酰亚氨酯，碳二亚胺盐酸盐（EDC-HCl），均购自Sigma公司；Bio-Gel P-30，购自BIO-RAD公司；抗CD8单克隆抗体由本实验室自行制备，并经DEAE离子交换色谱纯化，双扩活性l：64，纯度大于90％；标准抗CD8单克隆抗体，为Pharmingen公司产品；羊抗小鼠IgG-FITC购自北京挚诚生物研究所；生物素标记辣根过氧[1] [2] 下一页
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