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热休克反应对缺血 |
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完全清楚。本实验在离体及在体大鼠心肌缺血-再灌的模型上，从自由基代谢、能量代谢以及70 kD诱导型热休克蛋白(inducible heat shock protein 70 kD,HSP70i)的合成三个方面，对其机制作了进一步的探讨。
材料与方法
一、材料：
采用SD大鼠，体重180～250 g，雌雄各半，由本校实验动物中心提供，随机分为热休克组(heat shock group,H-S,n=8)和对照组(control group,C,n=8)。SOD及MDA测定试剂盒，海军421医院抗衰老中心提供；核酸标记检测试剂盒，Boehringer Mannheim公司产品；尼龙膜，Bio-Rad公司产品。
二、方法：
1.热休克处理：按Currie等［2］的方法进行，然后于室温恢复2 h或24 h。
2.离体大鼠心脏Langendorff缺血-再灌模型：取恢复24 h的大鼠心脏，采用主动脉插管，置入37 ℃保温室内，进行主动脉灌流。灌流液为用95%的O2和5%的CO2饱和的Krebs-Hensleit液。灌流液的压力和温度严格保持恒定，0.8 kPa,(37±0.5) ℃，灌流量8～10 mL/min。操作完毕后，稳定预灌10 min，然后缺血30 min(灌流量为1 mL/min)，再灌30 min。
3.在体大鼠缺血/再灌模型： 取恢复24 h的大鼠，按宋来凤等［3］的方法进行，结扎冠状动脉左前降支缺血30 min，然后松结再灌30 min。
4.ATP的测定采用高效液相色谱法，糖原的测定采用蒽酮比色定糖法，乳酸的测定采用酶偶联四唑盐比色法，SOD(超氧化物歧化酶)活性的测定采用邻苯三酚法，MDA(丙二醛)含量的测定采用TBA法。
5.HSP70i mRNA的检测： 取恢复2 h及24 h的心室肌，提取细胞总RNA，作Northern dot blot。HSP70i cDNA探针采用地高辛标记。
6.统计方法： 采用单因素方差分析法，在SPSS统计学软件中处理，数据均以±s表示。
结果
一、离体部分：
1.分别取缺血前(Is 0)、缺血30 min(Is 30)、再灌30 min(Rp 30)的各组离体心室肌组织测糖原、乳酸及ATP含量，结果见表1。
表1 热休克反应对离体缺血-再灌心肌能量代谢的影响
Tab 1 Effect of H-S on energy metabolism of isolated rat heart(±s,n=8)
Glycogen(g/100g tissue) Lactic acid(g/100g tissue) ATP(μmol/g tissue)
C group H-S group C group H-S group C group H-S group
Is 0 5.9±1.1 6.4±1.6 22.2±9.3 27.1±7.4 8.05±1.45 8.96±2.09
Is30 3.9±1.0 2.9±0.9* 67.4±13.1 85.6±18.9* 1.58±0.26 2.66±0.60*
Rp30 4.4±1.0 3.2±1.3* 26.3±9.0 25.5±10.2 3.46±0.79 5.27±1.10*
*P＜0.05,vs C group
2.分别取缺血前、缺血30 min、再灌30 min的各组离体心室肌组织测SOD的活性及MDA的含量，结果见表2。
表2 热休克反应对离体缺血-再灌心肌SOD活性及MDA含量的影响
Tab 2 Effect of H-S on SOD and MDA of isolated rat heart(±s,n=8)
SOD(U/0.1 g tissue) MDA(nmol/0.1 g tissue)
C group H-S group C group H-S group
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