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小鼠精原细胞的分离和纯化 |
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张学明 赖良学 李德雪 李子义 文兴豪 杜惜明 岳占碰 王延钊
【摘要】 目的 探讨小鼠精原细胞的分离纯化。 方法 用组合酶消化法制备7～8d小鼠的生殖细胞悬液；用Percoll不连续密度梯度法分离精原细胞。 结果 所获细胞悬液内活细胞、死细胞及细胞团的百分比分别为90.08%、9.92%及8.91%；平均每个睾丸可获得4.136×105个细胞；精原细胞主要分布于位于27%～35%间的Percoll梯度中，其超微结构与7～8d小鼠睾丸切片内精原细胞的超微结构一致，经纯化后其纯度达68.76%。 结论 用组合酶消化、Percoll不连续密度梯度法分离的7～8d小鼠的精原细胞能满足体外培养的需要。
【关键词】 精原细胞；分离；小鼠
【中图分类号】 S865.1+30.1 【文献标识码】 A 【文章编号】 0529-1356(2000)03-235
SEPARATION AND PURIFICATION OF SPERMATOGONIA IN MOUSE
ZHANG Xue-ming, LAI Liang-xue, LI De-xue, LI Zi-yi, WEN Xing-hao，
DU Xi-ming, YUE Zhang-peng, WANG Yan-zhao
(Department of Histology and Embryology, Faculty of Animal Sciences and Technology,
Quarter-master University of PLA, Changchun 130062,China)
【Abstract】 Objective To study separation method of mouse spermatogonia by Percoll discontinue density gradient centrifugation. Methods Combination of enzymatic digestion was used to prepare germ cell suspension of mouse at 7-8 days and Percoll discontinue density gradient centrifugation was used to isolate spermatogonia. Results Percentage of living cells, dead cells,clumps in suspension was 90.08%, 9.92%, 8.91% respectively, and 4.136×105 cells could be obtained from one testis in average. Spermatogonia were mainly distributed in Percoll gradient between 27%-35%. Their ultrastructure was consistent with that in testis sections of 7-8 day old mouse. Purity of spermatogonia was 68.76% after they were purified. Conclusion Spermatogonia isolated from mouse at 7-8 days by combination of enzymatic digestion and Percoll discontinue density gradient centrifugation could satisfy the needs of culture.
【Key words】 Spermtogonia; Separation; Mouse
精原细胞的生理生化特性及其分裂增殖、分化、运动、衰老、死亡等项生命活动的调节机制的深入研究，精子发生机理的进一步阐明以及精原细胞异体、异种移植技术的实际应用，都迫切需要找到一种可行的方法将其分离纯化，以期得到较高产量和纯度的有活力的精原细胞，用于体外培养。资料表明，从成年啮齿类的睾丸分离粗线期及其后各发育阶段生精细胞的工作已取得可喜成绩，所获细胞的纯度已超过90%，产量达到107个［1］。但可用于体外培养的精原细胞的分离却一直进展不大。有些报道虽然纯度很[1] [2] 下一页
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