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大鼠肝大部切除后热休克处理对热休克蛋白和磷酸酶的影响 |
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in) and 2／3 hepatectomy(PH) respectively shows that the effect of PH-HS on Hsc70／Hsp68 content and phosphatase activity lasts 120 h; The PH in PH-HS can reduce ACP and AKP activity and Hsc70／Hsp68 expression. The HS in PH-HS can change the time of ACP and AKP enhancing activity and inhibit expression of the Hsc70／Hsp68 induced by PH. Conclusion ACP, AKP and Hsc70／Hsp68 play an important role in heat shock response of liver cells and liver regeneration, but ACP is more important in originating liver regeneration, while AKP and Hsc70／Hsp68 probably exert the effect in DNA synthesis and cell division.
【Key words】 Liver regeneration; Heat shock(HS); Conserved heat shock protein 70／induced heat shock protein 68(Hsc70／Hsp68); ACP; AKP; Rat
肝再生是一种受到机体和细胞本身精细调控的细胞去分化、增殖和再分化过程［1］。而且也受外界因素(包括热休克处理)的影响［2］。已有实验证明，同一种或不同种刺激按适当间隔时间连续2次或多次刺激机体和／或细胞时，前1次刺激会影响细胞对以后刺激的反应，下1次刺激也会改变细胞对以前刺激的反应，无论是热休克处理还是肝大部分切除都会引起机体和细胞发生抵抗和适应反应，这两种刺激联合使用对肝再生有何影响是值得研究的问题［3～6］。本实验研究了2／3肝切除(2／3 hepatectomy)和热休克(heat shock)联合处理(PH-HS)对肝再生过程中ACP、AKP和热休克蛋白(Hsc70／Hsp68)的影响，结果如下：
材料和方法
1.实验动物和化学药品及试剂
成年SD纯系大白鼠，由河南师范大学生物系实验动物房提供，雌雄各半，体重200～250g。
明胶(Sigma)、Hsc70／Hsp68的一级抗体(StressGen,产品编号SPA-820，为鼠源性单克隆抗体，其制备抗原是人Hsc72／Hsp70，但亦能与人、灵长目动物、兔、大鼠和牛的Hsp70／Hsc70N端1～180氨基酸区域特异结合)、二级抗体(华美生物工程公司产品，为山羊抗鼠IgG-AP)、过氧化物酶标记链霉卵白素(SP，华美生物工程公司)，实验所用的化学试剂至少为分析纯。
2. 2／3肝切除-热休克处理(PH-HS)及样品制备
将大白鼠随机分组(每组至少3只)，乙醚麻醉，按Higgins方法切除2／3肝(即切除第1、2、3肝叶)，于室温恢复4h，接着，置于44±0.5℃的电热鼓风恒温箱内(加有湿盒)30min，然后于室温分别恢复2、4、6、8、10、12、16、20、24、36、48、72、96和144 h后，脊椎脱臼处死，摘除眼球放血，(1)用于组织化学和免疫组织化学分析时，直接切取脏脏备用；(2)用于制备匀浆液时，用肝门静脉灌注法［7］将肝叶中的血液洗净后，取下置于加有冰冷生理盐水的培养皿中剪碎，在4℃、40mmol/L NaCl、20mmol/L Tris-HCl、pH7.5的缓冲液(材料湿重∶缓冲液=1∶5)中匀浆，12 000g离心10 min，取上清液，分装，-85℃保存备用。
3.ACP和AKP的组织化学
将肝脏切成5×5×3mm小块，置液氮中速冻后用冰冻切片机连续切片(厚8μm)，用4℃冷丙酮固定20 min，以Gomori铅法显示ACP，其中，样品在保温液中保温(37℃)40 min;以Gomori钙-钴法显示AKP，其中，样品在保湿液中保湿(37 ℃)1h；用不加β-甘油磷酸钠的作用液做阴性对照。
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