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小鼠下颌下腺条件培养上清对造血祖细胞增殖的影响 |
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gulation in murine submandibular glands.
【Key words】 Submandibular gland conditioned medium;Hematopoietic progenitor cell; Hematopoietic growth factors;Hematopoiesis;Mouse
70年代初，国外学者发现小鼠与大鼠下颌下腺含有骨髓集落刺激因子(CSF)和红细胞生成素(EPO)［1，2］，提示下颌下腺与造血调控有关。迄今为止，有关下颌下腺参与造血的文献报道甚少，且存在较大差异［3～7］。本实验采用造血祖细胞体外培养及造血生长因子(HGF)活性检测等实验血液学技术，较系统地观察了小鼠下颌下腺组织培养上清对髓系造血祖细胞增殖分化的影响，旨在探讨下颌下腺与血细胞发生的关系，为认识下颌下腺对造血功能的调节提供实验依据。
材料和方法
1. 实验动物
8～12周BALB/c纯系小鼠，体重18～25g。重庆医科大学实验动物中心提供。
2. 主要试剂
RPMI-1640培养基、DMEM培养基、甲基纤维素(美国GIBCO公司产品)；马血清(HS)和EPO(中国军事医学科学院产品)；重组人白细胞介素-3(rhIL-3)(第三军医大学分子生物学教研室提供)；琼脂(日本进口分装)；盐酸苯肼(北京化工厂产品)，生理盐水配成16g/L。
3. 小鼠下颌下腺组织培养上清(SGCM)的制备
3.1 贫血小鼠模型复制：小鼠经腹腔1次性注射盐酸苯肼水溶液(80mg/kg)后，检测红细胞和血红蛋白值均显著低于正常鼠为模型复制成功标准［8，9］。
3.2 正常或贫血雄、雌性小鼠下颌下腺组织培养上清(雄性SGCM、雌性SGCM、雄性A-SGCM和雌性A-SGCM)的制备：取雄性和雌性正常或贫血小鼠(模型复制成功后第3d)下颌下腺(图1，2)，RPMI-1640培养液清洗3次，剪成约2mm3大小，浸泡2h，分别按1∶2∶7比例将下颌下腺组织块(g)，马血清(ml)和RPMI-1640培养液(ml)加入培养瓶内。培养5d，收集上清。同时将含有20%HS的RPMI-1640培养液(无下颌下腺组织块)加入培养瓶内，孵育5d，收集，作为阴性对照备用。
4. 小鼠造血祖细胞体外培养
粒单系祖细胞(CFU-GM)、红系祖细胞(BFU-E,CFU-E)和巨核系祖细胞(CFU-Meg)培养、集落染色鉴定与计数方法均为本室常规方法［9～11］。在造血祖细胞培养体系中分别加入不同条件下制备的SGCM，根据祖细胞形成的集落数和性质评价SGCM中所含造血生长因子的活性与种类。同时设加入已知HGF的阳性对照组和无外源性HGF的阴性对照组。
结果
1. SGCM对粒单系祖细胞(CFU-GM)的影响
无已知的外源性粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)存在时，10%(V/V%)的雄性SGCM或雌性SGCM对CFU-GM增殖均有明显的刺激作用(图3，4)，两者的集落产率无显著性差异，但显著低于阳性对照组；而阴性对照组的集落产率为零(附表)。
附表 SGCM对小鼠骨髓造血祖细胞的影响
Table Effect of SGCM on development of bone marrow s hematopoietic progenitor cells in mice
组 别
groups
阳性对照组
positive control group 阴性对照组
negative control group 雄性 SGCM组
male SGCM group 雌性SGCM组
female SGCM group
n ±s n ±s n ±s n ±s
CFU-GM 14 117.14±20.40
14 0 14 71.64±17.01
14 81.79±14.69
BFU-E 20 28.05± 4.56 20 0 20 31.40± 8.40 20 27.70± 9.08
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