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人外周血NK细胞纯化方法的初步比较 |
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徐彤 田志刚 张彩 张建华 夏青 孙
摘 要 目的：初步探索NK细胞的纯化方法并在此基础上研究其生物学特性。 方法： 分 别利用Panning法、补体裂解法、绵羊红细胞花环法对NK细胞进行纯化并利用流式细胞仪检 测其纯度，利用MTT法检测NK细胞对K562细胞的杀伤特性，利用RT-PCR检测NK细胞在IL-2 作 用下IFN-γ基因表达情况。 结果：NK细胞的纯度由纯化前10％左右提高到55.75％，不同纯化 方法有所不同，纯化NK细胞较天然人PBMC对靶细胞K562的杀伤作用强，IL-2的促进作用更 为 明显，纯化NK 细胞较外周血单个核细胞（PBMC）有更强的体外增殖能力，NK细胞在IL-2 作用下IFN-γ基因表达提高。 结论： 初步建立了人外周血NK细胞纯化及体外扩增的方法，纯 化NK细胞与人PBMC和LAK细胞相比具有独特的生物学特性。
关键词 NK细胞 纯化 增殖 白细胞介素-2
中国图书分类号 R392.12
Preliminary study on the purification methods of human NK cells
XU Tong, TIAN Zhi-Gang, ZHANG Cai et al.
(Shandong Cancer Biotherapy Center, Shandong Academy of Medical Sciences, Jinan 250062)
Abstract Objective: To study the biological characteristics of purified hum an NK cells. Methods: Human NK cells were purified from the peripheral blood by T cell panning, complement lysis and sheep red blood cell rosettes method (SRBC) . Compare the cytolytic activity, proliferation ability and IFN-γ mRNA expre ssi on of the purified NK cells and PBMC by MTT, cell counting and RT-PCR respectiv e ly. Results: NK cells were purified from 10% to 55.73% at most. The cytolytic ac tivity and proliferation ability of purified NK cells are stronger than those of PBMC. The expression of IFN-γ mRNA of the purified NK cells was enhanced whe n s timulated by IL-2. Conclusion: Purified NK cells have different biological char acteristics compared with PBMC or LAK cells.
Key words NK cells Purification Proliferation Interleukine-2
NK细胞是重要的淋巴细胞亚群，NK细胞可以从骨髓、胎肝、胎脾及脐血中获 得，但人成 熟NK细胞的主要来源是外周血。由于NK细胞仅占外周血单个核细胞的5～10％，因此NK细胞 的纯化及体外扩增是研究NK细胞重要的方法学基础。NK细胞不仅在不需要特异抗原的刺激 下即可杀伤肿瘤细胞和病毒感染细胞，它的功能还受多种细胞因子的调节，其中IL-2在体 外可显著促进NK细胞的杀伤功能及增殖。本研究利用几种不同方法对NK细胞进行纯化并对纯 化NK细胞的生物学活性进行了初步研究。
1 材料与方法
1.1 培养液 RPMI1640（GIBCO，美国），用时配成含10％小牛血清（NCS ）、20 mmol/L HE PES、L-谷氨酰胺30 mg/ml、5×10-5 mol/L 2-巯基乙醇及常规量青、链霉素，下简称完全培养基。
1.2 主要试剂 淋巴细胞分离液（上海荣盛生物试剂厂）、50 μ[1] [2] 下一页
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