|
干扰素对HL |
| |
细胞之间的作用特点，做了深入研究，现总结报道如下 。
1 材料与方法
1.1 细胞来源
1.1.1 HL-60细胞 山东省医学科学院免疫室张玲研究员赠送，本室自 行传代培养。
1.1.2 耐ATRA的HL-60细胞 HL-60细胞生长至对数增殖期，调整至2× 106 ml-1，以0.1 ml细胞悬 液加入96孔板中，然后加入ATRA，自1×10-9mol/L开始，按倍增浓度换液培养，至H L-60 细胞良好生长于1×10-6mol/L为止。以极限稀释法克隆，反复3次，稳定生长良好， 则ATRA耐药HL-60细胞诱导成功，称为ATRA耐药HL-60细胞。
1.2 细胞增殖实验
1.2.1 IFNα(300万U/支，USA)对HL-60或ATRA耐药HL-60细胞增殖影响 收集对数生长期 HL-60或者ATRA耐药HL-60细胞，调至5×106 ml-1，以0.1 ml加入96孔培养板中 ，再加入0. 1 ml IFNα溶液(250 U/ml,500 U/ml…8 000 U/ml)。37℃,5%CO2培养72 h。按文献MTT 法进行测定 细胞增殖性，设3复孔。
1.2.2 IFNα对L-CFU形成影响 按半固体琼脂法培养［3］。即 调HL-60或ATRA耐药HL-60 细胞至1×105 ml-1，按该细胞悬液0.35 ml，2×MC COYSA 0.55 ml，0.1%PHA 1 ml混合，37℃ ,24 h。加上述IFNα 0.2 ml，0.6%Agar 1.9 ml，每浓度浇3只平皿。CO2孵育培养7 d，观察结果，计算集落数。
1.3 IFNα对HL-60细胞分化的作用 对数生长期HL-60细胞或ATRA耐药HL-60细胞调至5×105 ml-1，培养 于 含上述不同浓度IFNα培养液中，37℃,5%CO2,72 h，取1 ml细胞悬液，加NBT溶液1 ml( 1 mg/m l),TPA 200 ng,混匀，37℃5%CO2,1 h,1 000 r/min 5 min，沉淀细胞涂片，瑞氏染色 ，油镜计200个细胞，计阳性率。
1.4 IFNα对HL-60或ATRA耐药HL-60细胞凋亡影响 调对数生长期HL-60或ATRA耐药HL-60细胞为1×106 ml-1，0.1 ml加 入96 孔板中，加上述不同浓度IFNα 0.1 ml,37℃,5%CO2，饱和温度培养36 h，收集细胞 ，按流式细胞仪分析DNA含量变化，形态学观察凋亡现象。
1.5 IFNα在ATRA诱导HL-60或ATRA耐药HL-60细胞中的作用 选择2×103 U/ml，0.1 ml IFNα加入96孔板中，再加入ATRA耐 药 HL-60细胞，培养48 h后(37℃,5%CO2)，RPMI1640洗3遍(1 000 r/min 5 min)调细胞 数 1×106 ml-1，0.1 ml/孔加入96孔板中，加0.1 ml不同浓度的ATRA(10-9 …10-4mol/L)继续 培养72 h，前述MTT或NBT法测定。设HL-60细胞和ATRA耐药HL-60对照组。
2 结果
2.1 IFNα对HL-60细胞或ATRA耐药HL-60细胞 增殖影响 图1中，IFNα随浓度加大，对HL-60细胞或ATRA耐药HL-60细胞抑制作用增强。对HL-60细 胞或ATRA耐药HL-60细胞分别在1×103 U/ml和2×103 U/ml时开始产生明显抑制作用( P<0.05)。
图1 IFNα对HL-60细胞或ATRA耐药HL-60细胞增殖影响
Fig.1 Effect of IFNα on proliferation of HL-60 cells or ATRA resistan t HL-60 cells
图2 IFNα对HL-60或ATRA耐药HL-60细胞L-CFU形 成影响
Fig.2 Effect of IFNα on L-CFU colonys of HL-60 cells 上一页 [1] [2] [3] 下一页
上一个医学论文： 蜂毒多肽BVI
下一个医学论文： 抗心磷脂抗体检测及其影响因素的研究
|
|
|
|
|
|
|
您现在的位置： 绿色健康网 >> 医学论文 >> 基础医学论文 >> 正文