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预处置对急性缺血再灌注肝脏保护机制的初步探讨 |
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预处置(preconditioning)即反复短期缺血再灌注，基本不引起肝脏损伤，但对其后的长时间缺血、再灌注却增强了耐受性［1］，其机制尚不清楚，尤其与一氧化氮(nitric oxide, NO)及氧自由基(oxygen free radicals, OFR)水平的关系少有报道。本研究观察预处置对家兔肝缺血再灌注过程中生化、组织方面的影响变化，初步探讨了预处置对较长时间肝缺血再灌注所致肝损伤(hepatic ischemia and reperfusion injury, HIRI)的作用机制，为临床保护肝脏提供理论基础和实验依据。
材 料 和 方 法
一、模型复制
健康日本大耳白兔(家兔)30只，雌雄兼有，体重1.6～2.8 kg，氨基甲酸乙酯(1.0 g/kg iv)麻醉，分离一侧颈外静脉以备采血。消毒开腹，暴露肝门，于尾状叶上方游离肝左叶、中叶、右中叶及方形叶的血管、胆管，用无损伤钳夹闭血管，造成该4叶完全性缺血，45 min后松夹重新灌注45 min形成HIRI［2］。
二、动物分组
随机将家兔分为3组：对照组(A组)，10只，仅行游离肝脏但不阻断其血流；缺血再灌注组(B组)，10只，缺血45 min后再灌注45 min；预处置组(C组)，10只，反复3次缺血5 min再灌注5 min后再缺血45 min再灌注45 min。
三、标品采集
3组分别在肝缺血前、缺血45 min、再灌注45 min自颈外静脉取血以测定血浆一氧化氮代谢产物(NO-2/NO-3，NOx)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量及谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)值，并在实验毕立即处死动物，取左中叶肝组织制成10%匀浆，以测定NOx及MDA水平。同时取少许左中叶肝组织以备光镜、电镜观察。
四、检测方法
硝酸还原酶法测定NO-2/NO-3含量，硫代巴比妥酸法测定MDA含量，赖氏法检测ALT值，前2种试剂盒均由南京建成生物工程研究所提供。HE染色光镜观察，LKB-V型超薄切片机切片，H-500型透射电镜观察。
五、统计分析
所有数据均以±s表示，采用组间、组内t检验判断均数差异显著性。
结 果
一、3组动物HIRI时血浆NOx、MDA含量及ALT值的变化，见表1。
二、3组动物HIRI时肝组织NOx及MDA含量的测定值，见表2。
表1 3组动物HIRI时血浆NOx、MDA含量及ALT值的变化及比较
Tab 1 The change and comparison of NOx，MDA contents and ALT value in plasma during HIRI among three groups (±s,n=10)
Group NO-2/NO-3(μmol/L) MDA(μmol/L) ALT(U)
A Pre-Is 30.35±8.27 5.60±0.21 38.90±5.00
Is45min 30.30±8.80 5.70±0.74 39.50±5.04
Rp45min 29.88±8.61 5.57±0.71 38.30±4.28
B Pre-Is 29.16±12.88 5.70±0.50 38.10±2.85
Is45min 26.09±9.32 5.98±0.55☆ 47.30±4.63☆☆
Rp45min 19.66±9.24☆☆★★Δ 7.70±0.66☆☆★★ΔΔ 61.70±8.28☆☆★★ΔΔ
C Pre-Is 29.84±8.94 5.63±0.75 39.00±6.58
Is45min 28.17±8.53 5.78±0.75 41.20±5上一页 [1] [2] [3] 下一页
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