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哮喘患者不同期外周淋巴细胞 肾上腺素能受体的变化 |
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解期哮喘患者外周淋巴细胞βAR密度较正常人明显增高，并推测βAR的这种变化可能与哮喘患者所处状态有关，只是哮喘病程中伴随出现的一种病理变化［3］。本研究拟进一步对不同期哮喘患者外周淋巴细胞βAR及血浆cAMP、cGMP水平变化进行比较，以期探讨不同状态哮喘患者βAR数量及功能变化规律，同时测定通气功能，并分析βAR与cAMP、cGMP及通气功能之间的相关。
材 料 和 方 法
一、对象
缓解期哮喘患者19例，男10例，女9例，年龄22～63岁。发作期哮喘患者11例，男10例，女1例，年龄33～65岁。受试者检测前24 h停用支气管扩张剂，采血前48 h停用βAR激动剂，6个月未用任何糖皮质激素［4］。正常人12例，男6例，女6例，年龄18～56岁。无心肺及其他器官器质性疾病，无过敏性疾病史。1月内无上呼吸道感染。
二、主要仪器与试剂
Beckman Gamma 5500同位素仪(USA)；Beckman LS-9800液闪计数仪(USA)；Chest HI-498肺功能仪(Japan)；醋酸纤维滤膜49＃(上海虹光造纸厂)；125ICYP(Amer sham);cAMP、cGMP测定试剂盒(均为中国原子能科学研究院)。
三、方法
(一)外周淋巴细胞βAR测定 取4～5 mL抗凝外周静脉血，常规分离外周淋巴细胞，PBS液配成4×106～8×10６个单核细胞/mL的均匀悬液。台盼蓝排除试验显示淋巴细胞存活率＞95%。取总结合与非特异结合管各6管，并各设平行管。每管内加淋巴细胞悬液50 μL，放射活性配基氰心得静(125iodocyanopindolol,［125I］CYP) 20 μL，(终末浓度25～200 pmol/L，共设6个不同浓度梯度)。总结合管内加Tris-HCL缓冲液5 μL，非特异结合管内加心得舒液5 μL(终末浓度为10 μmol/L)。总反应体积均达到75 μL。37℃水浴1 h。加5 mL预冷的Tris-HCL缓冲液终止反应，立即倾倒在双层醋酸纤维滤膜上减压抽滤，以5 mL同样液体洗涤试管2次，抽滤。将膜片置于Beckman Gamma 5500同位素计数仪内计数。不同放射配基浓度非特异结合占总结合的20%～40%。所得数据经Scatchard公式转换求得受体最大结合容量Bmax和平衡解离常数Kd(Scatchard作图均为直线，且直线方程的回归系数在统计学上有显著意义)。(二)血浆cAMP、cGMP水平测定 取2.5 ml抗凝外周静脉血，4℃分离出血浆，无水乙醇凝结蛋白，沉淀并以75%乙醇洗涤，取上清置60℃水浴吹干，-20℃存放。分别采用［3H］标记的cAMP、cGMP试剂盒进行测定。加入50 mmol/L醋酸缓冲液(1/2血浆体积)溶解样品干渣，加样50 μL，同时制备标准曲线。每次测定均取双管，经过加样，保温，微孔滤膜抽滤，膜片烤干等过程，Beckman LS-9800液闪计数仪计数，从标准曲线计算血浆cAMP、cGMP含量。(三)肺通气功能测定 Chest HI-498肺功能仪测定通气功能FEV1，FEV1/FVC，PEFR。
结 果
一、不同期哮喘患者外周淋巴细胞βAR的Bmax、Kd及血浆cAMP、cGMP水平、通气功能与正常人的比较见表1。
表1 不同期哮喘患者外周淋巴细胞βAR的Bmax, Kd,血浆cAMP,cGMP水平及通气功能
Tab 1 βAR in peripheral lymphocytes, cAMP, cGMP levels in blood plasma and ventilatory function
of normal subjects and asthmatics in different stages(±s)
Group Bmax
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