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磷酯酶A2抑制剂DTNB对大鼠心肌缺血再灌注心律失常的影响 |
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ion, so that reduces myocardial damage caused by I/R, and suggests that PLA2 plays an important role on myocardial I/R arrhythmia, and also implies that activated KATP prevents rats from I/R arrhythmia under condition of our experiments, but the relationship between DTNB protective effect and KATP activity remains indefinite.
［MeSH］ Myocardium; Ischemia; Arrhythmia; Nitrobenzenes; Calcium; Phospholipases A; Potassium channels
大量研究表明心肌细胞膜磷脂的减少与心肌缺血再灌注(ischemia/reperfusion, I/R)损伤有着密切的关系［1］。心肌I/R时，磷脂酶A2(phospholipase A2, PLA2)被激活，不但引起磷脂的减少,而且对KATP活性具有调节作用。但目前尚未有关于PLA2在I/R心律失常中作用的报道。DTNB全名5，5二硫代-二（2硝基苯甲酸），是一种巯基抑制剂，可通过共价修饰作用抑制PLA2［2］。离体组织细胞实验表明DTNB对KATP有一定的抑制作用［3］。本实验选用PLA2抑制剂DTNB观察PLA2在大鼠I/R心律失常中的作用，并探讨了DTNB对抗I/R心律失常的作用与KATP激活的关系。
材 料 和 方 法
一、实验动物
健康雄性Wistar大鼠体重200～300 g，由本校实验动物中心提供。
二、主要试剂
药品：DTNB（Sigma，美国）；Glibenclamide（RBI，美国）；Pinacidil(RBI，美国）；Isoptin(Knoll，德国）。
试剂盒：磷酸肌酸激酶（creatine phosphokinase, CPK）测定试剂盒（中国北京化工厂精细产品有限公司）；乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）测定试剂盒（中国北京化工厂精细产品有限公司）。
三、主要仪器
FZG-81直流前置放大器(中国上海嘉龙）；SR54超低频双线示波器（中国宁波东风无线电厂）；奔腾计算机（中国联想）；微型动物呼吸机（中国第二军医大学）；生物信号采集板（中国南京隆海科技实业公司生理科学研究所）；全自动生化分析仪（瑞士,COBAS）。
四、实验方法
1．大鼠心肌I/R模型复制 大鼠用乌拉坦（20%，1g/kg ip）麻醉后，气管插管，微型动物呼吸机维持呼吸，频率50～60次/min，潮气量5 mL/100 g。左侧第4肋间开胸，暴露心脏，在左心耳与肺动脉圆锥之间左冠状动脉起始点下方2～3 mm处，垫一薄乳胶圈，用4号线结扎左冠状动脉前降支，对照组只穿1条4号线但不结扎。实验组于结扎前5 min给药，结扎左冠状动脉前降支10 min后，放开再灌注10 min。整个实验过程中用Ⅱ导联记录心电，经FZG-81直流前置放大器放大。 一方面由SR54超低频双线示波器监测，另一方面经生物信号采集板采集心电图数据，用GNSA软件记录在奔腾计算机。然后断头取血3～5 mL测定LDH和CPK。实验结束后进行统计分析。
2．心律失常实验分组（每实验组大鼠6只） a. 对照组：给予0.9% NaCl 1.0 mL(Con组)；b. DTNB(16 mg/kg)组 (D组)；c. KATP阻断剂glibenclamide(0.3 mg/kg)组(G组)；d. glibenclamide(0.3 mg/kg)+DTNB(16 mg/kg)组(GD组)；e. KATP开放剂pinacidil(0.2 mg/kg)组(P组)。
3． LDH，CPK水平测定 见试剂盒说明书。
4．心律失常评分标准 心律失常分析遵守Lambeth规则。心律失常评分标准参考Curtis等［4］标准。其中非持续性与持续性室颤以2 min为限。早搏（premature ventricular contraction，PVC）：1分； 二联律/齐射（bigeminy/salvos）：2分；室速（ventricular tachycard上一页 [1] [2] [3] 下一页
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