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不同转移能力的肺腺癌细胞系金属蛋白酶活性分析 |
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描保存。在SDS－PAGE凝胶中加入明胶作为明胶酶底物，用来检测细胞培养基中明胶酶的活性。在电泳条件下，明胶酶和金属蛋白酶组织抑制因子的复合体会自动解体，明胶酶原会自动活化，因此，酶原及其活化形式均可检测到。
1.4 图像分析
利用Leica Q550IW图像处理软件对zymography结果进行灰度扫描，测定电泳条带的积分吸光度值，对各细胞系之间的金属酶活性进行定量比较。
2 结 果 与 讨 论
肿瘤细胞分组与明胶酶活性的关系(见表1)。
高转移肺腺癌细胞系除A549外，均有MMP－2,MMP－9活性，而低转移细胞系仅能检测到极低的MMP－2活性(见图1)。
具有转移能力的肿瘤细胞能够直接分泌或者通过诱导宿主基质细胞分泌胶原蛋白酶降解ECM，穿过细胞外基质和基底膜在原发灶远端形成转移性克隆。基质金属蛋白酶MMP是人体内降解细胞外基质的主要蛋白酶家族，参与肿瘤细胞转移等众多生理和病理过程。目前研究发现，MMP家族16个成员具有相似的结构和功能［3］。并根据他们亚微结构的不同分为三组。许多实验表明，MMP与肿瘤的转移相关，肿瘤细胞系的体内体外实验中，均发现有MMP－2,MMP－9的表达。同时，也有实验发现，在肿瘤病人的血清、血浆、尿液及肿瘤组织内均可检测出MMP的大量表达。大量的实体瘤中也检测到MMPS在mRNA和蛋白水平的表达。而MMP的表达量与肿瘤的转移能力密切相关。
为了检测MMP与肺腺癌转移相关性的关系，分别检测9种具有不同转移能力的肺腺癌细胞系中明胶酶MMP－2和MMP－9的产生和活性。结果发现，转移能力相对高的细胞系中MMP－2与MMP－9的活性均较高，而转移能力相对较低的细胞系中则只表达MMP－2，不表达MMP－9。综合上述结果可以看出，体外培养的肺腺癌细胞系产生MMP的能力与其转移能力有一定的相关性，同时MMP－9的表达与肿瘤的转移更为相关。
所采用的zymography分析方法是一种高度敏感直观的对蛋白酶进行定性定量分析的方法［4］，可以检测到微微克的蛋白活性，因而具有高度灵敏性。
表1 肿瘤细胞分组与明胶酶活性关系
Table1 The relationship hetweeon the activities of mmps and lung cancev cell lines
分组 细胞 转移性 积分吸光度值
MMP-2 MMP-9
高转移细胞系 A549 高 9.9337 0.234
18 高 6.5842 1.8341
95D 高 6.8437 2.2319
PG 高 14.256 3.54
Anip973 高 12.874 2.846
低转移细胞系 AGZY83-a 低 0.651 0.000
A2 低 1.376 0.000
GLC 低 1.843 0.000
SPG 低 1.652 0.000
图1 人肺腺癌细胞系明胶酶活性分析
Fig.1 Zymographic analysis of MMP in human lung adenocarcinoma cell lines
1.A549;2.AGZY83-a;3.SPC;4.GLCl5.PG;6.A2;7.Anip973;8.95D;9.18.
基金项目：黑龙江省科学技术计划攻关和青年科学基金资助项目（Q98－9）及黑龙江省科学技术计划攻关项目（G99C20－6－1）资助
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