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不同转移能力的肺腺癌细胞系金属蛋白酶活性分析 |
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闫承慧 吴焱 金焰 傅松滨
摘 要：为了探讨肺腺癌细胞系中金属蛋白酶的活性与其转移能力之间的相关性，选取9个转移能力不同的肺腺癌细胞系，分别对它们所分泌的金属蛋白酶MMP－2、MMP－9进行活性分析。结果发现，金属蛋白酶的活性与肺腺癌细胞系的转移能力有一定的相关性，其中MMP－9的活性与肺腺癌细胞系的转移相关性更显著。
关键词：肺腺癌；金属蛋白酶
中图分类号：R734.2 文献标识码：A 文章编号：0253－9772(2000)04－0239－02
Zymographic Analysis of MMP in Human Lung Adenocarcinoma
Cell Lines with Differential Metastatic Potential
YAN Cheng-hui WU Yan JIN Yan FU Song-bin
（Laboratory of Medical Genetics,Harbin Medical University,Harbin,Heilongjiang 150086， China）
Abstract:To investigate the relationship between the MMP activities and metastatic ability in human lung adenocarcinoma cell lines with differential metastatic potential.Nine lung adenocarcinoma cell lines were tested for their MMP activities by zymographic analysis methods.The MMP production capabilities of carcinoma cells rose following the increase of their metastatic potentials.The result suggested that there was some relationship between MMP－9 activties and metastatic potential in human lung adenocarcinomas.
Key words:lung adenocarcinoma；matrix metalloproteinases(MMP)
肿瘤细胞能够侵袭它们的周围环境而发生转移，从而对人的生命产生更大的威胁。而肿瘤细胞转移的最关键原因是细胞外基质的降解，这个过程使肿瘤细胞从原始位点侵袭到其他组织器官［1］。MMP是一组由多个成员组成的蛋白水解酶家族。目前研究发现，肿瘤细胞侵袭转移的能力与其产生或诱导产生MMP的能力密切相关。我们通过检测9个肺腺癌细胞系的MMP活性，探讨MMP和肿瘤侵袭转移的相关性［2］。
1 材 料 与 方 法
1.1 细胞系
共9个转移能力不同的肺腺癌细胞来用于分析，其中高转移性人肺腺癌细胞系PG、18、95D和A549，低转移性人肺腺癌细胞系A2、SPC从中国科学院上海细胞研究所引进。高转移人肺腺癌细胞系Anip973，由本院病理教研室从低转移细胞系AGZY83－a经裸鼠体内传代得到，PAa从北京医科大学肿瘤所引进，GLC从本校肿瘤所引进。
1.2 细胞培养
将细胞接种于24孔板中，用含10％新鲜胎牛血清的RPMI 1640培养基培养至长到80％～90％密度时，弃去培养基，用PBS清洗3遍后，加入无血清的RPMI 1640培养基0.2ml培养24小时，收集培养上清液，离心去除细胞碎片，根据细胞计数调整各组细胞培养上清液中的蛋白浓度，使其与细胞数相当。分装，－70℃保存。为了避免误差，平均每个样品做二个复孔。
1.3 明胶酶活性分析
配制10％SDS－PAGE胶（含1％明胶），作为分离胶，上层为6％的积层胶，以15μl的细胞培养上清液上样，150V恒压电泳1小时后，取出凝胶放入2.5％Triton－×100溶液中浸泡2小时，然后在50mmol/L Tris·Cl,200mmol/L NaCl,10mmol/L CaCl2,pH7.5的明胶酶缓冲液中37℃孵育18小时，考马斯亮蓝染色。脱色后，扫[1] [2] 下一页
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