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采用能谱法研究铅对大鼠血脑屏障的通透性 |
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suggests that the plasmalemma of endotheliocyte endosurface was the initial target in brain, where was affected by lead, and the consecutive endotheliocytes of blood vessels served as a blood-brain barrier to lead, although in a very weak action. A little bit accumulation of lead on the plasmalemma of endotheliocyte endosurface could cause damage in the close junction between endotheliocytes to spread to brain substance, same as the lanthanum tracing showed.
【Key words】 Lead Blood-brain barrier
本实验室关于铅对大鼠脑细胞的超微结构、钙分布和酶活性的影响已有报道［1，2］。现报道用电子探针-能量色散X射线分析(energy-dispersive X-ray analysis，EDX)结合电镜硝酸镧示踪，用高分辨力分析透射能谱电镜，在观察血脑屏障结构与通透性变化的同时，通过EDX能谱分析观测铅在毛细血管基膜内、外侧分布的结果。研究铅从血液进入脑实质的可能机制，血管内皮细胞连续层对铅的屏障作用和阈值。
材料与方法
1.材料：醋酸铅和硝酸镧为分析纯（上海试剂总厂），锇酸为英国BDH 产品。
2.动物模型：刚断乳Spraque-Dewley大鼠36只，体重46.5～4.38 g，雌雄各半，上海实验动物中心提供。随机分为对照组、铅染毒10和30 mg/L组，每组12只。对照组动物从断奶起饮用去离子水，铅染毒组动物分别饮用去离子水配制的含醋酸铅18和54 mg/L的溶液(相当于10和30 mg/L铅)各3个月。染毒毕，各组分别取6只大鼠测血铅和脑铅浓度，另6只用作硝酸镧示踪和EDX能谱分析。
3.电镜硝酸镧示踪：按文献［2］处理。
4.能量色散X射线分析：用硝酸镧示踪法固定，将用于电镜检查的包埋块做超薄切片，其厚度比用作普通电镜观察的切片厚1倍，约0.018 μm，不染色，用H-800分析电镜的透射扫描系统STEM及EDX9100能谱系统，能量0～20 keV，根据铅的特定能量定点、定位收集铅的Mα和Lα谱线，收谱时间为100秒。
5.血和脑组织铅含量测定：血液经稀硝酸处理，脑组织经硝酸、高氯酸处理后导入石墨炉原子化器原子化，以上海市测试技术研究所水中铅成分分析标准物质作对照，根据铅的特征谱线吸收强度定量。
6.统计处理：数据以±s表示，用Student的t检验进行显著性检验。
结果
1.血铅和脑铅含量：大鼠饮用10和30 mg/L含铅水3个月后，血铅浓度分别为对照组的1.67和2.46倍；脑铅含量10 mg/L组与对照组相比差异无显著性，30 mg/L组为对照组的1.34倍(表1)。
表1 铅对幼鼠血铅、脑铅含量的影响(每组6只鼠，±s)
染毒剂量(ml/L) 血铅(mol/L) 脑铅(10 mol/L)
10 0.311 1±0.023 5* 4.826 3±0.6274
30 0.456 9±0.062 1* 6.418 9±0.772 2*
0 0.186 1±0.005 0 4.778 0±0.579 2
*与对照组比较P<0.01
2.血脑屏障通透性的变化:对照组毛细血管镧盐颗粒只位于血管腔内，并沿着内皮细胞内表面质膜密集整齐排列，内皮细胞内、外侧基膜中均不见镧盐颗粒(图1)。10 mg/L组基本与对照组相同，不见镧盐颗粒透至基膜。30 mg/L组在血管腔较大的毛细血管某些部位，可以清晰地看到镧盐颗粒穿过内皮细胞间的缝隙到达基膜及周细胞的基膜处(图2)。
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