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恙螨体内出血热病毒检测增殖及其定位 |
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张云 朱进 唐家琪 李先富 吴光华
【摘要】 目的 用分子生物学方法研究小盾纤恙螨的媒介意义。方法 聚合酶链反应和原位分子杂交法。结果 从恙螨体内检测到肾综合征出血热病毒RNA；取恙螨幼虫、若虫定期做肾综合征出血热病毒TCID50/ml滴定，证明恙螨体内肾综合征出血热病毒可传播并有增殖现象;用原位分子杂交技术在恙螨的卵巢细胞、支肠细胞等组织中检测到肾综合征出血热病毒RNA。结论 研究结果为恙螨的媒介意义提供了具有分子水平的直接证据，对肾综合征出血热的流行病学和预防具有重要的理论意义和实用价值。
【关键词】 恙螨 汉坦病毒 聚合酶链反应 RNA病毒
Detection and Proliferation of Hemorrhagic Fever Virus in Chigger Mites ZHANG Yun, ZHU Jin, TANG Jiaqi, et al. Institute for Military Medicine, Nanjing Command of PLA, Nanjing 210002
【Abstract】 Objective To study the impact of Leptotromhidium scutellaris as a vector in transmission of hemorrhagic fever. Methods Reverse transcription-polymerase chain reaction (PCR) and in situ hybridization technique were used to detect RNA of hemorrhagic fever with renal syndrome virus (HFRSV). TCID50/ml of HFRSV were titrated for larva and nymph of chigger mites periodically. Results RNA of HFRSV was detected in the tissues of chigger mites, such as ovary cells, etc. by PCR and in situ hybridization. Titration of TCID50/ml showed that HFRSV could be transmitted transstadially and porliferated in chigger mites. Conclusion It provides direct evidence at molecular level for the role of chigger mite as a vector in transmission of HFRSV with theoretical and practical importance in prevention of HFRS.
【Key words】 Trombiculiol mites Hantan virus Polymerase chain reaction RNA, viral
根据流行病学资料，1954年Traub等提出恙螨是肾综合征出血热(HFRS)可疑传播媒介，但长期未被证实。1988～1992年，我所与陕西省卫生防疫站协作研究证明，小盾纤恙螨能自然感染、叮刺传播和经卵传递HFRS病毒(HFRSV)，经证实该种螨为HFRS的媒介。1996年我所采用病毒学和分子生物学方法对恙螨体内HFRSV进行检测、增殖和定位研究,以期为恙螨的媒介意义提供进一步证据，主要结果如下。
材料与方法
一、材料
恙螨来源见文献［1］。 Vero-E6细胞由中国预防医学科学院病毒学研究所提供，用于测定HFRSV TCID50／ml。根据实验要求和引物设计原则，设计了与HFRSV76-118株cDNA中M基因片段相互补的2个寡核酸引物。正向引物：cDNA 440～459 bp，反向引物：cDNA 635～654 bp。第1个引物：5′-AATAGC-ACATACTGCAAGCC-3′，第2个引物：5′-CTTGCTATA-GCAAAGATCCC-3′。两引物间距离为215 bp。验证该引物符合引物设计要求。合成引物、纯化、真空冷冻干燥后备用。PCR试剂盒、AMV-逆转录酶、10×PC[1] [2] 下一页
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