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抗氧化剂对黄曲霉毒素染毒的转基因小鼠肝肿瘤的防护 |
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R and inhibit growth of hepatocellular altered foci. These actions may effectively put off hepatocellular carcinogenesis in mice.
【Key words】 Mice, transgenic Butyolated hydroxyanisole Aflatoxin B1 Liver neoplasm, experimental
乙型肝炎病毒（HBV）感染和黄曲霉毒素（AFB1）是肝癌的两大相关因素，在肝癌发生中具有启动剂和/或促进剂的作用。近年研究认为，HBV感染的肝脏不仅有氧自由基过量产生和抗氧化防御机制降低，而且因谷胱甘肽S转移酶（GST）活性下降，削弱了对化学物质的解毒能力［1］。这些变化可能与肝细胞遗传损伤和累积固定以及最终恶性转化密切相关。
我们应用HBV包膜转基因小鼠染毒AFB1制作肝癌模型， 观察2,3-叔丁基-4-羟基茴香醚(BHA)对实验性小鼠肝肿瘤的防护作用。
材料与方法
一、实验动物及分组设计
HBV包膜转基因小鼠50-4系, 携带人类HBV ayw血清亚型Bgl Ⅱ-A片段(含Pre-S, S, X基因)。4～6周龄时用ELISA法检测血清乙型肝炎表面抗原（HBsAg）确定转基因阳性。转基因雄性小鼠49只，分普通饲料组和BHA组，部分小鼠染毒AFB1，非转基因雄性小鼠48只作对照。BHA组饲料添加0.5% BHA，每只小鼠平均每天摄食2～3 g，相当于每天摄入BHA 10～15 mg。小鼠于13～15月龄时被脱臼处死。
二、主要试剂
BHA、AFB1、甲萘醌和还原型GSH等购自Sigma公司，HBsAg ELISA检测试剂盒购自美国Abbort 实验诊断中心，1-氯-2,4-二硝基苯(CDNB) 、1,2-二氯-4-硝基苯(DCNB)购自Aldrich公司。
三、实验方法
1.HBV转基因小鼠染毒AFB1协同致肝癌模型的建立：将AFB1混悬于三辛酸甘油脂中，给3～5月龄的小鼠做腹腔注射，每次AFB1 2 μg/g体重，间隔8天，共3次，总剂量6 μg/g体重。将小鼠处死，取肝做匀浆，同时做肝脏病理学检查。
2.肝细胞胞质液肝醌还原酶(QR)活性检测：方法参照文献［2］。
3.肝细胞胞质液GST活性检测：方法参照文献［3］。分别测定以CDNB和DCNB为反应底物的两种GST同工酶活性。
4.肝匀浆肝丙二醛(MDA)含量测定：采用硫代巴比妥酸法。
5.电子自旋共振仪(ESR)测定肝氧自由基（OFR）浓度：每组取5～6例，将0.4～0.5 g肝组织于液氮速冻，在BRUKER ESP 300型电子自旋共振波谱仪上测试自由基信号。OFR每克肝组织测得的自由基平行峰高(g11,mm)表示。
6.统计学分析：实验数据采用双侧t检验及u检验。
结果
一、肝脏病理学检查
1.大体检查：肉眼可见部分小鼠肝脏表面弥漫性分布大小不等的灰白色结节，或全肝分布包膜下针尖样灰白色病变，形成巨大肿块者，质地稍脆、切面苍白，无出血和坏死。肝结节发生率、结节数目和大小在各组之间的比较见表1。
表1 13～15月龄实验小鼠肝表面结节的大体观察
组别 例数 结节发生率
(%) 结节数目(±s)
<2 mm 2～4 mm 5～10 mm >10 mm
(+)C 14 43
1 427.67±929.88 1.33± 1.63 0.33±0.52 0
(+)B 14 21* 212.67±92.79** 1.33± 2.31 0 0
(+)/黄曲霉毒素C 9 100** 2 125.21±2 037.59* 16.89±23.37** 1.67±2.21 0.56±1.67
(+)/黄曲霉毒素B 12 100** 210.58±97.52**## 0.67± 1.23## 0.08±0.29## 0.08±0.29#
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