|
Fos蛋白在LPS免疫激发大鼠脑内的分布 |
| |
关的中枢神经系统结构提供一些线索。
材料和方法
1. 动物与分组
成年SD大鼠10只，体重250～350g，安静、温暖(20℃)、避强光的环境中饲养48h。随机分为实验组(n=6)和对照组(n=4)。
2. 实验组
2.1 动物模型及切片制备：乙醚吸入麻醉后，经腹腔注射300μl生理盐水溶解的LPS 100μg(Sigma,0127∶B8)，动物存活3 h后用1%戊巴比妥钠深麻，开胸经左心室至升主动脉插管，先以100 ml生理盐水冲洗血液，随后用冷的(4℃)含4%多聚甲醛的0.1mol/L磷酸盐缓冲液(PB，pH7.4)灌流固定。灌毕取全脑置于含30%蔗糖的0.1mol/L PB内(4℃)至组织块沉底。冰冻连续冠状切片，片厚30μm。
2.2 免疫组织化学染色：切片入含0.3% Triton X-100处理后，按ABC法先进行抗Fos免疫组织化学反应。依次孵育于：(1)兔抗Fos抗体稀释液(1∶3000，Santa Cruz)24h(4℃);(2)生物素标记的羊抗兔IgG(1∶500,Sigma)2h(室温)；(3)生物素-卵白素-HRP复合物(ABC，1∶500,Sigma)2h(室温)。以上每一步骤之后均用PBS液充分漂洗3次，每次10min。最后用葡萄糖氧化酶-DAB-硫酸镍胺法呈色。然后常规裱片、脱水、透明、DPX封固、光镜观察。
3. 对照组
3.1 麻醉对照实验(n=2)：正常大鼠经乙醚吸入麻醉，3h后戊巴比妥钠深麻处死，灌流固定取材同前，切片按ABC法进行Fos免疫组织化学染色。
3.2 生理盐水对照实验(n=2)：正常大鼠乙醚吸入麻醉后经腹腔注入300μl生理盐水，存活3h后戊巴比妥钠深麻处死。切片按ABC法进行Fos免疫组织化学染色。
3.3 免疫组织化学染色替代实验：取实验组大鼠部分大脑切片，用0.01mol/L PBS代替兔抗Fos第一抗体，再按ABC法进行免疫组织化学染色。
结果
1. 实验组
1.1 大脑：额顶皮质和扣带皮质有较密集的Fos阳性分布。梨状皮质(图1)、外侧隔核腹侧部、中央杏仁核(图2)、斜角带核及终板血管器内有中等密度的分布(图3)。其他皮质及核团分布均稀少。
1.2 间脑：下丘脑和丘脑区域Fos阳性产物主要密集分布于下丘脑室旁核(图4)和丘脑室旁核(图5)，弓状核、视上核(图6)、视交叉上核和下丘脑外侧区等有中等密度的分布，外侧缰核和正中隆起内亦可见到少许Fos表达。
1.3 小脑：小脑内无明显Fos分布密集区。
1.4 脑干：中脑导水管周围灰质腹外侧部及外侧臂旁核内有中等密度的Fos阳性分布，脑桥核、上丘、前庭内侧核和蜗神经核内也有少量的Fos阳性分布。Fos阳性细胞在延髓的分布极具规律性，主要密集分布于中、尾段延髓，多为深染，两侧呈对称性分布。集中分布于延髓背内侧部(DMM)，其次分布于延髓腹外侧区(VLM)及位于两者之间的中间网状带(IRt)内，三者形成了一条背内-腹外方向伸展的弧形带状区——延髓内脏带。Fos阳性细胞在DMM内主要分布于弧束核联合亚核、内侧亚核和最后区(图7)，VLM内主要位于腹外侧网状核(图8)，在IRt则主要集中于其内侧部。此外，三叉神经脊束核、外侧楔核和下橄榄核等也有少量的Fos分布。
图1 大脑梨状皮质内Fos阳性细胞 ×40
Fig.1 Fos positive neurons in the piriform cortex. ×40
上一页 [1] [2]
上一个医学论文： Fos蛋白在血管加压素诱发急性心肌缺血大鼠脑内的分布
下一个医学论文： 用BrdU标记技术观察大鼠脊髓上胸段灰质细胞的分化发育
|
|
|
|
|
|
|
您现在的位置： 绿色健康网 >> 医学论文 >> 基础医学论文 >> 正文