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小鼠树突状细胞肉瘤不同转移能力克隆的分离筛选鉴定 |
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刘玉琴 顾蓓 赵雪梅 李存玺 高进 章静波
【摘要】 目的 利用小鼠树突状细胞肉瘤(DCS)细胞分离鉴定不同肺转移能力的克隆细胞株，为进一步筛选与肺转移相关cDNA片段奠定基础。 方法 采用极限稀释单细胞克隆法，分离出不同克隆，经体内生长转移性，体外水解酶分泌等方法进行鉴定。 结果 DD1、DG6肺转移分别为100%，27%，其具蛋白酶水解能力的细胞分别为15.80%和5.39%，DG6的体内生长明显较DD1缓慢。 结论 筛选出了高肺转移克隆DD1，低肺转移克隆DG6。
【关键词】 树突状细胞肉瘤；肺转移；克隆；小鼠
【中图分类号】 R730；R731-33 【文献标识码】 A 【文章编号】 0529-1356(2000)04-332
SCREENING AND IDENTIFICATION OF CLONES WITH DIFFERENT
METASTATIC ABILITY FROM DENDRITIC CELL SARCOMA CELLS
LIU Yu-qin GU Bei ZHAO Xue-mei LI Cun-xi GAO Jin ZHANG Jing-bo
（Institute of Basic Medical Sciences, Chinese Academy of Medical Sciences Peking
Union Medical College, Beijing 100005, China）
【Abstract】 Objective From dendritic cell sarcoma(DCS) cells, to screen and identify lung metastatic clones for further screening of lung metastasis related cDNA. Methods Limited dilution was used to isolate and establish single cell clones. In vivo metastasis and in vitro proteolysis were used to determine different clones. Results The rate of lung metastasis of clone DD1 and DG6 were 100% and 27% respectively. The percentages of proteolytic cells of them were 15.80% and 5.39% respectively. The in vivo growth of DG6 is obviously slower than that of DD1. Conclusion DD1 proved to be a high lung metastatic clone, while DG6 a low lung metastatic clone.
【Key words】 Dendritic cell sarcoma, Lung metastasis, Clone; Mouse
肿瘤细胞的侵袭转移是肿瘤治疗的难题，肿瘤的转移是由异质性的母系群体中，少数具有高转移能力的细胞而形成的。肿瘤的转移还具有器官亲和性［1］，因此肿瘤转移是肿瘤细胞与宿主器官组织相互作用、特异选择的结果。本研究的目的就是从高转移性肿瘤细胞系中分离、鉴定不同肺转移能力的克隆细胞，为进一步克隆肿瘤转移器官亲和性cDNA片段或基因奠定基础。
材料和方法
1.细胞来源及培养
实验选用本室自建肿瘤细胞系，小鼠树突状细胞肉瘤(DCS)［2］，常规RPMI1640培养基加10%新生牛血清和双抗(青霉素105IU／L、链霉素105IU/L)培养。
2.DCS细胞单克隆细胞株的分离
收集对数生长期DCS细胞，台盼蓝染色，活细胞>95%。采用连续稀释法稀释至10个细胞／ml。96孔板2块，每孔加0.1ml该稀释细胞悬液，然后再加入0.1ml培养液，贴壁2h后，倒置显微镜下观察并标出单细胞孔。连续5d反复标记单细胞孔，快速生长的克隆于10d时接种6孔板，扩大培养。
3.DCS细胞及克隆细胞蛋白水解能力的鉴定
详细方法见文献［3］。简言之，用小鼠血浆[1] [2] 下一页
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