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关节炎中B7 CD28 CTLA |
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g牛II型胶原（BIIC）与5 ml FA研磨均匀后，以100 μl/只皮内注入50只大鼠尾部。21 d后以100 μg/只的BIIC再次免疫大鼠，分别于第25天，第30天，第35天，第40天，第45天取10只大鼠进行临床指征、组织病理学和血清免疫学分析。将CTLA-4Ig和对照Ig分别于初次免疫7 d后开始注射入相应大鼠（每4天 1 mg/kg大鼠）。
1.3 依据大鼠每只爪的症状临床指征评估 为1～4分，1：红；2：肿；3：趾关节变形；4：关节强直。
1.4 血清抗胶原抗体滴度测定 采用眼眶后取血的方法，在不同时间采取大鼠全血。分离血清并冻存于-20℃。经加热灭活后用ELISA法检测抗体滴度。首先用0.1 ml的0.01 mg/ml的BIIC包被微量滴孔板，4℃过夜；用1%BSA进行封闭；血清经1:500稀释后加入滴孔，室温孵育2 h；加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的兔抗大鼠IgG抗体，室温孵育1 h；加入3,3-二氨联苯胺过氧化物酶反应底物；在酶标仪405 nm处读取光密度（OD值）。
1.5 组织病理学检查 取鼠爪浸泡于福尔马林溶液3 d后脱钙，进行石蜡包埋，经过胫骨和跗骨关节中心纵行切片，用苏木素和伊红染色。
1.6 统计学处理 不同组间均值方差分析及t检验。
2 结果
2.1 CTLA-4Ig可阻止SD大鼠发生胶原诱发性关节炎 本研究以BIIC和CFA混合物免疫SD大鼠，并于3 w后进行再次免疫，之后于不同时间对SD大鼠观察到关节炎的发生，并且发病率随免疫时间的延长而增加，如图1。
为定量评估疾病活动程度，我们对大鼠关节症状程度进行了评分。结果表明，注入CTLA-4Ig的大鼠中未发生关节炎的临床症状，而注入对照Ig的大鼠组在第25天时已出现关节炎症状，病情发展到第45天时出现关节强直。其临床指征评分如图2所示。
图1 BIIC诱发大鼠关节炎
Fig.1 Incidence rate of BIIC induced rat arthritis
图2 大鼠关节炎临床指征评分
Fig.2 Clinical index of rat arthritis
图3 大鼠模型血清抗BIIC抗体水平
Fig.3 The levels of anti-BIIC antibody in rat models
2.2 CTLA-4Ig可降低大鼠对BIIC的体液免疫反应 本研究对BIIC免疫SD大鼠后不同时段的血清抗BIIC抗体滴度。结果表明，对照组大鼠在经BIIC免疫后，血清中抗BIIC抗体水平迅速上升，与大鼠的关节炎病程相平行，而且在观察期内维持高水平。而经CTLA-4Ig处理的大鼠中的抗BIIC抗体滴度显著低于相应时段的对照组大鼠（P<0.01），如图3。
2.3 组织病理学分析 本研究对CTLA-4Ig处理与否的大鼠经BIIC免疫后的爪关节进行组织切片分析。经苏木素和伊红染色，在光镜下可见，经IgG2a处理的对照组大鼠的关节出现了明显的单核细胞浸润，多形核细胞聚集，关节膜增厚，软骨及骨损伤。淋巴结炎和骨损伤。而经CTLA-4Ig处理的大鼠未出现明显的组织改变和炎症反应过程。
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