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蓖麻毒素诱导U937细胞分泌IL |
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董巨莹 张小光 赵英 药立波 苏成芝
摘 要 目的：进一步研究蓖麻毒素是否具有诱生U937细胞分泌细胞因子的作用。方法：采用MTT法检测了蓖麻毒素对U937细胞的毒性，并采用ELISA法测定细胞培养上清中的IL-6和IL-8。结果：蓖麻毒素对U937细胞的毒性具有时间效应和剂量效应。随着作用时间的延长，诱生2种细胞因子的量逐渐增加；随蓖麻毒素剂量的增加，诱生2种细胞因子的量均减少。结论：蓖麻毒素诱导2种细胞因子的产生为其抗癌应用或其它作用提供理论依据。
关键词 蓖麻毒素 U937细胞 IL-6 IL-8
中国图书分类号 R392.31
Induction of IL-6 and IL-8 on U937 cell by ricin
DONG Ju-Ying，ZHANG Xiao-Guang，ZHAO Ying et al.
Department of Biochemistry and Molecular Biology，the Fourth Military Medical University，Xi an 710032
Abstract Objective:Ricin is a glycoprotein from ricinus communis seeds.In order to study induction of cytokine by ricin.Methods:The toxicity has been detected by MTT method and production of IL-6 and IL-8 has been detected by Kit.Results:It showed that the toxicity of ricin for U937 cell has time-responses and dose-responses. Both of cytokines have increased as the time is prolonged.Conclusion： Production of cytokines may have a role in the pathogenesis of ricin toxic effect and anticancer.
Key words Ricin U937 cells Interleukin-6(IL-6) Interleukin-8(IL-8)
蓖麻毒素(ricin)是存在于蓖麻籽中的一种糖蛋白。以往认为，它能使真核细胞内的核糖体60 S亚基灭活，从而抑制细胞内蛋白质合成导致细胞死亡［1］。近期研究表明，ricin的毒性作用除可抑制核糖体外，还能诱导人外周血单核细胞或U937细胞产生TNF-α和IL-1β［2，3］，这些细胞因子的产生对正常组织具有强烈的毒性作用，但对癌细胞也具有杀伤力。本研究采用ELISA法检测了蓖麻毒素诱生U937细胞产生IL-6和IL-8的作用，该研究为蓖麻毒素的应用提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 主要试剂 噻唑蓝(MTT)为Fluke公司产品。二甲基亚砜(DMSO)为Sigma公司。细胞培养液RPMI1640购于Gibco公司。IL-6和IL-8检测试剂盒购于美国Genzyme公司，深圳晶美公司分装。U937细胞购于上海细胞生物所。蓖麻毒素按Lappi方法提取［4］，纯化的蓖麻毒素经非还原性的SDS-PAGE鉴定为单一条带，相对分子质量(Mr)为65 000 kD。
1.2 蓖麻毒素对U937细胞的毒性测定 U937细胞培养用含10%胎牛血清的RPMI1640在CO2孵箱中培养至对数生长期时，收集计数后，在96孔培养板中每孔加入1×105个细胞。实验分为2组，一组加入不同浓度的蓖麻毒素，作用24 h；另一组加入1 pmol/L 的蓖麻素素作用不同的时间。同时设阴性及阳性对照，阴性对照不加细胞，其他同实验组；阳性对照加细胞，不加蓖麻毒素，其它同实验组。每5孔为1组，细胞浓度相同，每孔体积为200 μl。培养一定时间后，移去上清液，用培养液洗涤2次，加入新鲜配制的MTT(以5 mg/ml的浓度每孔加入20 μl)。作用4 h后，出现蓝黑色结晶，每孔加入二甲基亚砜150 μl，振荡15 min，使结晶充分溶解，选择490 nm波长，在酶联免疫检测仪上测定各孔的吸收值，记录结果。
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