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人成纤维细胞生长因子13基因在酵母细胞中的表达 |
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孙蒙 于永利
摘 要 目的：用酵母细胞表达重组人成纤维细胞生长因子(hFGF13)蛋白并检测其活性。方法：通过RT-PCR从流产胎儿脑组织中钓取hFGF13cDNA，将其克隆入pYEX4T-1载体质粒。在酵母细胞表达GST-hFGF13融合蛋白。以细胞增殖实验测定酵母表达蛋白粗提物的活性。结果：GST-hFGF13融合蛋白在酵母细胞中得到表达；GST-hFGF13融合蛋白能刺激NIH3T3细胞的增殖，而且此活性能够被FGFR1细胞外段所拮抗。结论：所获得的重组hFGF13能与FGFR1特异性结合，并具有促有丝分裂活性。
关键词 人成纤维细胞生长因子13(hFGF13) 酵母 表达
中国图书分类号 R392.33
The expression of human fibroblast growth factor 13 in Yeast cells
SUN Meng, YU Yong-Li.
Department of Immunology, Norman Bethune University of Medical Sciences Changchun 130021
Abstract Objective：To recombinant hFGF13 protein and detemine is activyty.Methods: The cNDA of human FGF13 was isolated from fetal brain by RT-PCR and into pYEX4T-1 plasmid. Then the recombinant pYEX4T-1-hFGF13 plasmid was transfected into yeast cell (DY150) and the expression of hFGF13 was induced by Cu++. The dialyzed protein released from ultrasonic-lysed yeast cell was used for the determination of biological activity of recombinant GST-FGF13. Results: Western-blot analysis showed that hFGF13 was expressed in yeast cell as GST-FGF13 fusion protein. The GST-FGF13 protein can stimulate the proliferation of NIH3T3 cells and this aetivity could be antagonized by recombinant extracellular part of FGFR1. Conclusion: Obtained recombinant hFGF13 can bind to FGFR1 specifically and have the mitogenic activity.
Key words Human FGF13(hFGF13) Yeast cell Expression
成纤维细胞生长因子家族(FGFs)是结构上有一定同源性的一组蛋白质，目前包括19个成员［1］。FGFs通过作用于成纤维细胞生长因子受体(FGFRs)而发挥其生物学功能。FGF受体是免疫球蛋白超家族的成员。FGFs对源于中胚层和神经外胚层的细胞都有促增殖分化作用，因而参与胚胎发育、损伤修复、血管生成、神经再生以及肿瘤形成等生理和病理生理过程。FGF13是新近发现的一个FGF家族成员。研究表明，小鼠FGF13在小鼠的胚胎发育，特别是神经系统的发育过程中可能发挥重要作用［2］。为研究人FGF13的功能，我们自胎儿脑组织以逆转录PCR的方法获取编码人FGF13的cDNA，将此cDNA克隆入酵母表达系统进行表达，并对表达产物进行活性测定。
1 材料与方法
1.1 酶、质粒、菌株、主要试剂及实验标本 EcoRⅠ、SalⅠ、PstⅠ、T4DNA 连接酶购于宝泰克生物公司；逆转录酶、Taq DNA聚合酶购于Promega公司。pCRTMⅡ质粒、INVαF菌购自Invitrogen公司；hFGF13特异性PCR引物由上海生工合成；Rnase购于华美生物工程公司；酶标驴抗兔抗体由本室提供。逆转录试剂盒，购[1] [2] 下一页
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