|
支气管哮喘发病中 2AR mRNA水平变化的初步探讨 |
| |
过敏性疾病史及家族史。1月内无上呼吸道感染；缓解期哮喘患者15例，男7例，女8例，年龄20～61岁。受试者采血前24 h停用支气管扩张剂，48 h停用β2AR激动剂，1月内未用任何皮质激素类药。动物实验部分：200 g左右雄性Wistar大鼠。按苗会等的方法(另文发表)复制哮喘大鼠模型，先在大鼠皮下注射卵蛋白及氢氧化铝混合液，同时腹腔注射灭活百日咳菌苗，2周后经气道滴入1.7%的卵蛋白激发，处死取其肺组织用于β2AR mRNA测定。
2.主要设备与试剂：XHF-1高速分散器(上海兴华电子仪器厂)，Slee恒冷切片机(England),Beckman RC-SC型高速冷冻离心机(USA)，3K30型低温高速离心机(Sigma)，PCR循环仪(中国科学院遗传所)，Beckman LS-9800液闪计数仪(USA)。AMV-RT(Promega), Taq DNA聚合酶(中国科学院遗传所)，［α-32］?P-dC TP(Amersham), Dig DNA Labeling and Detection Kit (Boehringer mannheim)。
二、方法：
1.人外周淋巴细胞β2AR mRNA测定：常规方法分离外周单个核细胞，并按chomczynski等［2］的方法提取总RNA并进行电泳鉴定。根据Kobilka等［4］报道人β2AR基因序列设计合成一对寡核苷酸引物。下游引物序列为5′-CATAGGCTTGGTTCGTGAA-3′，上游引物序列为5′-ATTGAGACCCTGTGCGTGA-3′，经计算机检索证明有很好的特异性，用于RT-PCR反应，并通过其产物的放射性测定来反映β2AR mRNA的相对含量。2.大鼠肺组织匀浆β2AR mRNA测定：根据Buckland等［5］报道的大鼠β2AR基因序列设计合成一对寡核苷酸引物，下游引物序列为5′-CATAGGCCTGGTTCGTGAA-3′,上游引物序列为5′-ATCGAG ACCCTGTGCGTGA-3′，亦经计算机检索证实有很高的特异性，用于RT-PCR反应，其余与人体实验相似。3.大鼠肺组织β2AR mRNA原位检测：按照RNA检测要求制备大鼠肺组织冰冻切片，置-70℃存放。通过含β2AR cDRNA质粒细菌培养，感受态细胞制备与转化，质粒限制性内切酶酶切分析及大量制备、纯化与cDNA目的片段回收制备β2AR cDRNA探针，并用酶反应法进行标记及检测，用于原位杂交。最后通过计算机图像处理系统测定肺组织杂交信号的辉度值，反应β2AR mRNA的水平。
三、统计处理：
数据以()表示，差异显著性用t检验检测。
结果
(一)正常人与缓解期哮喘患者外周淋巴细胞β2AR mRNA测定结果见表1。
表1 正常人与缓解期哮喘患者外周淋巴细胞
β2AR mRNA水平比较
Tab 1 Comparison of β2AR mRNA levels in peripheral lymphocytes
between normal subjects and asthmatics in remission stage ()
Group β2AR mRNA(counts.min-1)
NS(n=19) 23 583±1 686
AM(n=15) 26 387±2 176*
*P＞0.05，vs NS group; NS： normal subjects; AM: asthmatics in remission stage
(二)正常与哮喘大鼠肺组织匀浆β2AR mRNA测定结果见表2。
表2 正常与哮喘大鼠肺组织匀浆β2AR
mRNA水平测定结果比较
Tab 2 Comparison of β2AR mRNA levels in the
lungs between normal and challenged rats ()
上一页 [1] [2]
上一个医学论文： 茶多酚的离体抗氧化作用
下一个医学论文： 髓磷脂碱性蛋白促进单个核细胞对内皮细胞的粘附效应
|
|
|
|
|
|
|
您现在的位置： 绿色健康网 >> 医学论文 >> 基础医学论文 >> 正文