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动脉内皮损伤后平滑肌细胞维甲酸受体的表达及维甲酸的作用 |
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Vit A及其衍生物(如维甲酸，retinoic acid, RA)能调控VSMC向成熟分化［3，4］，防止其过度增殖。其它细胞系研究表明，细胞的低分化与RAR的低表达有关［5］，动脉损伤后VSMC的低分化及增殖是否与RAR的低表达有关目前尚无研究，本文就此进行探讨。
材料与方法
一、动脉内皮损伤模型的建立：
参照文献介绍的干燥法损伤动脉内皮细胞。简言之，新西兰家兔36只，雌雄不限，体重2～2.5 kg。氯胺酮(30 mg/kg)和安定(3 mg/kg)经静脉全麻下暴露双侧股动脉2 cm，其中32只暂时结扎游离动脉段两端，生理盐水冲洗管腔，再注入空气，持续8 min，解除结扎，恢复血流。32只动物随机分为2组：损伤对照组只喂饲料；损伤用药组每日经胃管灌入全反式维甲酸(atRA)(上海第六制药厂)20 mg。分别于术后24 h, 1、 2及4周处死动物，取损伤段血管液氮保存。另4只动物分离出血管后直接缝合皮肤，不损伤血管内皮，此为正常对照组，于术后第4周取动脉。所有动物均于术后当天起给予含2%胆固醇的饲料喂养。
二、组织处理：
参照文献方法进行组织处理［3］。每段动脉条取部份位置PBS液中清洗，剥去系膜组织，置含0.25%弹力酶Ⅰ和胶原酶的DMEM液中消化25 min以进一步去除系膜组织及内皮细胞。将消化后的血管条剪碎，匀浆，1 000×g离心5 min后弃上清，匀浆进行蛋白定量(考马斯亮兰法)。
三、放射配体结合饱和实验：
结合反应在DMEM液中进行，反应总体积为200 μL，含匀浆100 μL， 3 H-atRA(Sigma公司)(2×10-6 mol/L浓度) 50 μL， 缓冲液50 μL。非特异结合管中加2×10-6～2×10-5 mol/L 的9-cis-RA 50 μL反应管在37℃水浴中温育30 min后加预冷的2 mL PBS液中止反应，1 000×g离心3 min，弃上清，再洗3次，以除去游离的RA，沉淀物行液闪计数。按Scatchard作图求受体最大结合容量(Bmax)和平衡解离常数(KD)。
四、形态学测量：
动脉段行常规固定、包埋、切片，HE及Van Gieson染色。自动图像处理系统测血管内膜面积。
五、统计方法：
数据均用表示，均数差异的显著性用t检验判定。
结果
一、动脉内皮损伤后VSMC中RAR的表达(表1)：
表1 内皮损伤对VSMC中RAR表达的影响及RA的作用
Tab 1 Expression of RAR in VSMC after endothelial injury and effect of RA(,n=8)
Group(arteries) No-RA RA
Bmax(nmol/mg.pro.) KD(nmol/L) Bmax(nmol/mg.pro.) KD(nmol/L)
Normal 445.74±85.37 2.54±0.84
24 h 397.65±67.18 2.47±0.75 405.83±87.42 1.95±0.72
1week 193.25±54.25** 1.87±0.57 297.66±68.27▲ 2.37±0.81
2week 248.63±66.45** 1.75±0.63 385.61±77.24▲ 2.18±0.74
4week 394.27±80.52 2.14±0.68 413.25±85.46 2.35±0.89
**P＜0.01, vs normal; ▲P＜0.05, vs no-RA
动脉内皮损伤后1～2周，VSMC中RAR数量明显减少，至第4周接近正常，RAR亲和力无明显变化。
二、维甲酸的作用(表1)：
用RA组VSMC中RAR数量于损伤后1周明显低于正常，却明显高于未用药组，并提前于第2周恢复正常；维甲酸对RAR亲和力无影响。 上一页 [1] [2] [3] 下一页
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