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氯沙坦干预病毒性心肌炎恢复期 慢性期心脏胶原表达及心功能的实验研究 |
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significant difference compared with VMC that without intervening markably, CO improved. Conclusion At recovery stage, there could be two kinds of fibrosis course: reparative fibrosis and reactive fibrosis, the effect of these two courses may offset each other, this may be the reason why no influnence of cardiac index was observed. At chronic stage, collagen increased widely which is the result of reactive fibrosis, the proliferous collagen impaired greatly the cardiac function. Intervening by Losartan could improve cardiac function through suppressing reactive fibrosis during chronic phase of viral myocarditis.
【Key words】 losartan myocarditis collagen heart function tests
尸检或心内膜心肌活检证实,病毒性心肌炎慢性期主要病理解剖特点为心脏间质纤维化，但此点是否是患者心功能障碍的原因，尚不清楚。Ⅰ型、Ⅲ型胶原是心脏间质的重要成分，其中由Ⅰ型胶原为主组成的粗纤维较为强硬，含量稍增即影响心脏顺应性［1，2］。现已知病毒性心肌炎急性期胶原增生已经启动，但其作用是对坏死心肌的修复，即修复性纤维化［3］。因此，观察病毒性心肌炎恢复期及慢性期心脏胶原表达及其对心功能影响的规律，可以帮助我们全面了解病毒性心肌炎心肌间质的病理变化过程，为临床治疗病毒性心肌炎慢性期心肌纤维化提供实验依据。大量资料证实，血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂可明显抑制心脏间质胶原的合成过程，我们应用其代表性药物氯沙坦(losartan)对此问题进行了初步的探讨。
材料与方法
一、动物模型的制作
5周龄雄性Balb/c小鼠，腹腔接种柯萨奇B3病毒（CVB3）1×103 PFU 0.4 ml后，随机分为两大组。第一组为病毒性心肌炎恢复期动物，接种病毒后至12天随机分为A组(n=18)、B组(n=28),另设腹腔接种不含病毒的Eagle′s液后常规饲养的正常小鼠为C组(n=10)；其中B组经口饲氯沙坦10mg.kg-1.day-1［4］，A、B两组均用高蛋白饲料喂养；药物干预18天后，A组死亡11只，B组死亡16只，C组没有死亡。第二组接种病毒后30天，作为病毒性心肌炎慢性期动物随机分为D组(n=10)和E组(n=10),腹腔接种不含病毒的Eagle′s液后常规饲养的正常小鼠为F组(n=7);其中E组管饲氯沙坦，剂量同B组；30天后，D组死亡5只，E组死亡2只，F组没有死亡。将存活小鼠称重后进行以下处理。
二、心排血量的测定
用阻抗微分法对所有小鼠心排血量进行测定［5］，并计算心指数。
三、心肌标本的采集及处理
心排血量测定后立即开胸取出心脏，滤纸吸干称重后沿左室长轴剪为两份。一份立即放入液氮冷冻保存,以备RNA的提取；另一份立即放入10%的中性福尔马林液,固定24小时后行组织化学处理。
四、组织化学检查
将组织按常规冲洗，不同浓度酒精梯度脱水，二甲苯透明，浸蜡、包埋，切片（厚度5 μm），常规H.E.染色，苦味酸天狼猩红胶原特异染色［6］。所用试剂除特殊说明外，均购自北京天象人生物技术有限公司。
组织化学照片均用Pharmacia 公司的Ultro Scan LX JI激光密度扫描仪进行扫描，扫描面积积分半定量分析。
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