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IFN IL |
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同时与细胞温育2小时；病毒吸附后为病毒吸附细胞2小时后再加入细胞因子。取48小时感染上清测定病毒滴度。
(三) 病毒滴度的测定［1］ 用D2V敏感的C6/36单层细胞与甲基纤维素覆盖层的微量浊斑法滴定D2V，病毒滴度以病毒空斑形成单位(pfu)表示。
(四) 统计学处理 每次实验取实验组与对照组，每例作两个平行孔，实验数据用平均值±标准差表示，组间比较用t检验。
结 果
一、人单核细胞感染性测定
用5pfu/cell的D2V感染脐带血人单核细胞，取不同时间的上清测定病毒滴度，结果表明病毒感染48小时达高峰，以后逐渐下降。
二、IFNα对D2V复制的影响
选择病毒感染的不同时间加入IFNα作用于正常人单核细胞，取48小时感染上清测定病毒滴度，结果表明IFNα能抑制D2V复制，并与剂量正相关，抑制作用以病毒吸附前作用明显(见表1)。
三、IL-1β对D2V复制的影响
选择病毒感染的不同时间加入IL-1β作用于正常人单核细胞，取48小时感染上清测定病毒滴度。结果表明IL-1β能抑制D2V复制，并与剂量正相关，抑制作用以病毒吸附前作用明显(见表2)。
四、IL-2对D2V复制的影响
选择病毒感染的不同时间加入IL-2作用于正常人单核细胞，取48小时感染上清测定病毒滴度。结果表明IL-2低、中浓度 在病毒吸附前、吸附后能增加D2V复制，高浓度的IL-2对D2V复制无明显影响(见表3)。
五、IFNα、IL-1β和IL-2对未感染和感染的人单核细胞数量的影响
用不同浓度的IFNα、IL-1β和IL-2与未感染和感染的人单核细胞温育24小时，用结晶紫染色法在490nm处测A值。结果表明IFNα、IL-1β和IL-2对未感染和感染的人单核细胞数量无明显影响(P>0.05)。
讨 论
细胞因子与微生物感染密切相关，一方面病原体的感染能诱导宿主细胞产生细胞因子，另一方面细胞因子又能刺激或抑制病原体在宿主细胞中的增殖。国外有报道登革病毒感染人单核细胞产生IFNα，IFNα能抑制登革病毒的复制［2］登革病毒特异的CD4+CD8T细胞产生IL-2［3］；最近有学者提出登革病毒感染的发病机制与细胞因子的释放有关。本课题以人单核细胞为D2V感染的靶细胞，研究了IFNα、IL-1β和IL-2对D2V复制的影响，实验发现IFNα和IL-1β具抗病毒作用，与剂量正相关，这种效应在病毒吸附前加入明显，高浓度的IFNα在病毒吸附同时甚至病毒吸附后加入也能发挥较强的抗病毒作用，这是与最近的进展IFNα存在快速调控途径有关［4］。IL-1β具抗病毒作用，其机制有待近一步阐明。在IL-2对D2V影响的研究中发现，IL-2能增加病毒的复制，国外有学者报道IL-2处理能诱导低毒株柯萨奇病毒引起心肌炎［5］，提示IL-2增强病毒感染心肌细胞。我们的实验发现高浓度的IL-2对D2V复制无明显影响，推测细胞因子存在负反馈调节。三种细胞因子对正常的和感染的人单核细胞数量无明显影响，说明它们是通过调节细胞功能来影响病毒增殖。我们的实验结果提示IFNα、IL-1β和IL-2在登革病毒感染中起重要作用。
作者单位：510630 广州，暨南大学（曹艳英）；中山医科大学（郭辉玉）
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