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应用逆转录聚合酶链反应检测原发性肝癌患者外周血肿瘤细胞 |
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优点，使检测外周血中少量肿瘤细胞成为可能。我们采用RT-PCR技术对原发性肝癌患者外周血中甲胎蛋白(AFP)mRNA进行检测，以探讨其在预测肝癌血行播散方面的意义。
对象和方法
一、检测对象
原发性肝癌31例，男26例，女5例；年龄18～72岁，平均43.2岁，均经手术、影像学和血清AFP检查确诊。肝硬化患者20例，男14例，女6例，年龄24～76岁，平均46.1岁；正常对照20例，男10例，女10例，年龄24～45岁，平均49.3岁，系本院健康献血员或医务人员。肝转移性癌3例，肝脓肿2例。
二、标本收集和RNA抽提
取受检者肝素抗凝静脉血5 ml，常规方法分离外周血白细胞。收集6例手术切除肝癌和癌旁组织，剔除出血、坏死部分，所有标本-80℃贮存备用。采用异硫氰酸胍-酚-氯仿一步法提取外周血白细胞和肝癌组织总RNA［4］。经紫外分光和甲醛变性琼脂糖凝胶电泳鉴定，证明制备的RNA未受到明显的污染和降解。
三、引物
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