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红细胞膜脂肪酸成分 膜流动性改变与糖尿病视网膜病变的关系 |
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Fatty acids Membrane fluidity Diabetic retinopathy
糖尿病视网膜病变(DR)是糖尿病最常见的血管并发症，其发生机制尚未完全阐明。近年的研究表明，糖尿病时存在一系列红细胞流变性和功能改变，如变形能力降低，聚集性增加，物质运送功能障碍及膜酶活性和受体功能改变等，这些改变在DR的发生和发展中起重要作用。然而，导致糖尿病病人红细胞膜流动性改变的机制目前仍不清楚。为此，我们采用高效液相色谱法(HPLC)和荧光偏振技术对63例非胰岛素依赖型糖尿病(NIDDM)患者红细胞膜脂肪酸成分和膜流动性进行了分析，旨在了解糖尿病患者膜脂酸成分对膜流动性的影响及其与DR之间的关系。
对象与方法
一、对象
1.正常对照组：无糖尿病及慢性心、肝、肺、肾疾病的健康成人29例(男16例，女13例)，平均年龄55±9岁(44～67岁)。平均体重指数(BMI)23.47±2.28，均经口服葡萄糖耐量试验(OGTT)排除了糖尿病和糖耐量低减(IGT)。
2.NIDDM组：根据WHO标准确诊的NIDDM患者63例(男26例，女37例)，年龄58±8岁(46～70岁)。病程4个月～35年(中位数6年)，8例患者采用普通胰岛素治疗，其余均接受饮食控制加口服降糖药治疗。根据有无视网膜病变进一步分为(1)DR组：23例(男10例，女13例)，年龄60±5岁，BMI 24.12±4.35，均经眼底荧光造影检查证实存在DR。(2)无糖尿病视网膜病变(NDR)组：40例(男16例，女24例)，年龄57±7岁，BMI 22.56±2.66，均经眼底荧光造影检查无DR。
正常对照组、DR组及NDR组3组间年龄、性别构成、BMI均具可比性。
二、方法
1.红细胞膜脂肪酸成分测定：制备红细胞膜悬液并测定膜蛋白含量。采用氯仿-甲醇混合液提取脂类后，加入0.5 mol/L HCl-乙醇溶液于80℃水浴酸化1小时，再加1 mol/L KOH溶液于80℃皂化1小时，纯氮吹干后加入2-溴苯乙酮、18-冠醚-6等在80℃反应20分钟，吹干后甲醇重溶，进样10 μl行色谱分析。采用岛津LC-6A HPLC仪，配以SPD-6AV紫外检测器及C-R3A数据处理装置。色谱条件：采用C18反相色谱柱(150×4.6 mm ID，5 μm)，测定波长250 nm，柱温35℃，流动相：甲醇-乙腈-水(70∶20∶10)，流速梯度洗脱，内标法定量。组内变异系数平均为5.09%，组间变异系数为4.08%。脂肪酸回收率平均为94.75%。磷脂脂肪酸释放率为68%［1］。
2.红细胞膜微粘度测定：采用以1，6-二苯基-1，3，5-己三烯(DPH)为探剂的荧光偏振法［2］。
3.空腹血糖(FBG)及糖化血红蛋白(HbA1c)测定：FBG测定用酶法，HbA1c测定用微柱法。
三、统计学处理
各项数据以均数±标准差表示。采用F和q检验进行组间比较，指标间的关系判定采用直线相关分析。
结果
一、NIDDM组与正常对照组红细胞膜脂肪酸成分比较
NIDDM病人红细胞膜花生四烯酸(AA)含量和百分组成均明显低于对照组，差异有显著性(P＜0.05)，而DR与NDR两组间差异无显著性，P＞0.05(表1)。
二、NIDDM组与正常对照组红细胞膜微粘度、FBG、HbA1c水平比较(表2)
NIDDM病人红细胞膜微粘度明显高于对照组，而DR组膜微粘度又明显高于NDR组。DR组及NDR组的FBG和HbA1c水平明显高于对照组。上述差异均具有统计学意义。
三、NIDDM患者红细胞膜流动性与膜脂肪酸成分的相关分析
NIDDM病人红细胞膜廿二碳六烯酸(C22∶6 n-3)、AA(C20∶4 n-6)的百分含量与膜微粘度呈明显负相关(r=-0.300和r=-0.535，P值均＜0.01)，软脂酸(C16∶0)和硬脂酸(C18∶0)百分含量与膜微粘度呈明显正相关(r=0.461和r=0.340，P值均＜0.01)，不饱和脂肪酸百分含量亦与膜微粘度呈明显负相关(r=-0.440，P＜0.01)。
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