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强直性脊柱炎患者外周血单个核细胞HLA |
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正常小鼠IgG的溴化氰活化的Sepharose 4B柱；②连接HLA-B27单抗的溴化氰活化的Sepharose 4B柱。完成后以大量TES缓冲液洗柱，然后用0.05 mol/L乙二胺，pH 11.5，将两柱分别洗脱，洗脱液以1 mol/L Tris，pH 7.4，立即中和，将此液以蒸馏水透析后冻干备用。
1.2.4 SDS-PAGE分析纯度：采用12%分离胶，以0.1%考马斯亮蓝R250(水∶甲醇∶冰醋酸＝5∶5∶2配制)染色1 h，放入含40%甲醇和10%冰醋酸的水溶液中脱色至背景清晰。用凝胶图像光密度分析系统(UVP-GDS7500型)扫描并分析条带相对分子量。
2 结 果
Marker选用低分子量标准蛋白(珠海东风生化试剂厂)，经亲和层析法分离、纯化的蛋白在SDS-PAGE中显示为单一条带，经分析其相对分子量为56 400。
3 讨 论
AS好发于青壮年男性，患者可因疼痛、活动受限和逐渐发展的畸形而严重影响劳动力和生活质量，而患者家庭因需支付长期的医疗费用而负担沉重，故研究AS的发病机制及临床诊治意义重大。1973年Brewerton等［3］发现人类组织相容性Ⅰ类抗原HLA-B27与AS发病密切相关，90%以上AS患者表达HLA-B27，而一般人群中HLA-B27阳性率只有3%～7%。迄今为止，在发现的所有与疾病相关的HLA抗原中，HLA-B27与AS的相关性最大。
HLA-B27分子是由2条多肽链组成的，一条是α链或重链，约44 000，包括3个侧链α1、α2和α3，它们与另一条β链或轻链，即β2微球蛋白(约12 000)结合共同组成B27分子，其相对分子量约56 000。以往纯化的HLA-B27分子均来源于HLA-B27基因转染的细胞株，然后对其提呈的多肽进行研究，但这不能反映体内的真实情况，更无法比较出B27(＋)AS患者与B27(＋)正常人群的差异。为实现这一目的，本实验采用了HLA-B27单抗—FD705(与其他抗原无交叉反应)亲和层析法纯化AS患者外周血单个核细胞表面的HLA-B27抗原。结果显示，经此法纯化的抗原蛋白在SDS-PAGE中显示为单一条带，分析其相对分子量为56 400，证实为高纯度的HLA-B27抗原。本实验在国内外尚未见报道，对进一步研究HLA-B27与AS发病的关系具有重要意义。
作者单位：官健(510515 广州，第一军医大学南方医院脊柱骨病科)
金大地(510515 广州，第一军医大学南方医院脊柱骨病科)
史占军(510515 广州，第一军医大学南方医院脊柱骨病科)
丁红(外科实验室)
陆洁(外科实验室)
曹琼(外科实验室)
武大林(外科实验室)
参 考 文 献
1.白英，沈倍奋，程知义，等.单克隆抗体在临床医学中的应用.北京：人民军医出版社，1985.289-308.
2.Boisgérault F,Khalil I,Tieng V,et al.Definition of the HLA-A29 peptide ligand motif allows prediction of potential T-cell epitopes from the retinal soluble antigen,a candidate autoantigen in birdshot retinopathy.Proc Natl Acad Sci USA,1996，93:3466-3470.
3.Brewerton DA,Hart FD,Caffrey M,et al.Ankylosing spondylitis and HLA-B27.Lancet,1973,1:904-907.
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