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T细胞免疫核糖核酸治疗大鼠佐剂关节炎的研究 |
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1.1.2 材料：卡介苗：长春生物制品研究所产品。T细胞iRNA：中国医科大学制药厂生产。
1.2 方法
1.2.1 AA大鼠的诱发：取体重180～200 g的雄性大鼠50只，随机取10只作正常对照，其余大鼠均于右后足跖皮内注射卡介苗浓度为5 mg/ml的完全福氏佐剂(FCA)0.1 ml(正常对照组以同样方法注射等量生理盐水)诱发关节炎发生［2］。致炎后第14天，AA大鼠发病率为75%(30/40)，随机将关节炎大鼠分为两组，两组大鼠的关节体积和关节指数经统计学处理差异无显著性。动物共分为3组：①正常对照组(10例)；②关节炎组(14例)；③T细胞iRNA用药组(16例)。
1.2.2 T细胞iRNA给药：T细胞iRNA以生理盐水作溶剂，当日配制，每只鼠每次用量为6 mg/kg，药液总体积是0.5 ml，腹腔注射。致炎后第14天给药，每天1次，连续3 d，T细胞iRNA的给药方法、剂量及疗程依据iRNA治疗重症革兰氏阴性杆菌感染［3］。正常对照组和关节炎组注射等量生理盐水。
1.2.3 观察指标：每5 d观察一次关节体积、关节指数变化。前者以关节体积测定仪测定右踝关节以下排水毫升数计，后者按四肢远端关节肿胀程度总得分计。四肢关节肿胀程度按0～Ⅳ级评分：0：无红肿；Ⅰ：趾关节稍肿；Ⅱ：小趾关节和足跖肿胀；Ⅲ：踝关节以下足爪肿胀；Ⅳ：包括踝关节在内的全部足爪肿胀。
1.2.4 组织病理：于实验的第14天随机处死2只AA大鼠，取炎症关节做HE染色。第20天、25天、30天分别从关节炎对照组和T细胞iRNA用药组大鼠中随机选取2只处死，立即取左后肢脚、左右前肢脚的病变跖趾关节(继发病变)固定于10%的甲醛溶液中，24 h后4%稀硝酸脱钙，常规进行石蜡包埋，切片(5～6 μm)，HE染色。同时于同一天，从正常对照组大鼠中随机选取一只以同样方法取相同的跖趾关节做HE染色，作为正常对照，做病理切片观察关节组织病理学变化。
1.2.5 统计学处理：资料采用秩和检验，α水准0.05，显著性界值为0.05。
2 结 果
2.1 T细胞iRNA对AA大鼠关节体积的影响：注射FCA第14天诱发大鼠关节炎形成，腹腔给药T细胞iRNA观察踝关节以下体积变化，结果显示：给药5 d，AA大鼠踝关节以下体积与关节炎对照组比较无明显减少(P＞0.05)。给药10 d，与关节炎对照组比较，关节体积明显减少(P＜0.01)，给药15 d，关节体积减少更明显，与关节炎对照组比较差异具有高度显著性(P＜0.001)。见表1。
表1 T细胞iRNA对AA大鼠关节体积的影响(±s)ml
组别 只数 关节体积
5 d 10 d 15 d
正常 10 2.07±0.25 2.08±0.24 2.07±0.29
AA 14 6.12±1.14 6.03±0.89 5.97±0.91
AA＋iRNA 16 5.38±0.57Δ 4.65±0.73ΔΔ 4.02±0.52ΔΔΔ
注：与正常组比较P＜0.001；与AA组比较ΔP＞0.05，ΔΔP＜0.01，ΔΔΔP＜0.001
2.2 T细胞iRNA对AA大鼠关节指数的影响：注射FCA后14 d，大鼠诱发关节炎。给药后5、10 d观察AA大鼠关节指数，并与AA组进行比较，结果见表2。
2.3 组织病理学：AA＋iRNA组滑膜组织增生及炎症细胞浸润均较AA组明显减轻。作HE染色可见致炎后14 d炎症关节滑膜组织增生，纤维渗出并有炎性细胞浸润(见图1)，30 d AA组炎症关节重度滑膜炎，软骨破坏，关节结构消失(见图2)。AA＋iRNA组炎症关节滑膜组织增生明显减轻，少量炎症细胞浸润(见图3)。正常对照组30 d组织病理(见图4)。
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