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酶免疫斑点法检测心肌抗体结合吸附试验对风湿性心脏病的诊断意义 |
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周汉建 程颖 陈国庆 余步云
心肌抗体(heart reactive antibody,HRA)的检测对风湿性心脏病具有一定的诊断意义。但是，由于其他心脏疾病(如原发性心肌病、病毒性心肌炎等)患者血清中也可检测到HRA，因此，HRA诊断风心病的特异性意义尚有争议。本文作者应用酶免疫斑点法检测117例各种心脏病患者血清的HRA，并将测得的阳性血清用A组链球菌膜抗原进行吸附试验，以进一步探讨其特异性价值。
1 资料与方法
1.1 病例选择
1.1.1 心脏病组：①风心病35例，男21例，女14例，平均年龄(38±8)岁，均符合1992年修订的Jone′s标准。②原发性心肌病19例，男11例，女8例，平均年龄(45±9)岁，均符合1980年WHO/ISFC制定的诊断标准。③病毒性心肌炎18例，男10例，女8例，平均年龄(27±7)岁，均符合1987年全国心肌炎会议制定的标准。④缺血性心脏病30例，男18例，女12例，平均年龄(62±12)岁，包括急性心肌梗死7例，心绞痛23例。⑤其他心脏病16例，男9例，女7例，平均年龄(54±13)岁，包括肺心病13例，累及心脏的胶原性疾病3例。
1.1.2 正常对照组：32名，均为健康体检者，其中男20名，女12名，平均年龄(34±10)岁。
1.2 HRA检测和HRA吸附试验
1.2.1 材料制备：①用SD大白鼠心室肌提取心肌抗原。②A组溶血性链球菌膜抗原应用超声震荡法提取。③抗人HRP-IgG。④孔径0.45 μm的硝酸纤维膜(NC膜)等。
1.2.2 HRA的检测方法——酶免疫斑点法：步骤简单概括如下：将心肌抗原滴在NC膜上，干燥封闭后，加入稀释血清，孵育及冲洗后再加入抗人HRP-IgG酶标抗体，再孵育及冲洗后加入底物(DAB-H2O2)显色，呈黄色斑者为阳性。
1.2.3 HRA吸附试验：吸取HRA阳性血清0.1 ml，加0.1 ml A组链球菌膜抗原(采用方阵法预先选择最佳的链球菌膜抗原浓度)，以同一血清加0.1 ml PBS作为对照，孵育后移于4 ℃冰箱内过夜，取出各管于4 ℃下3 000 r/min离心30 min，吸取上清液制备稀释血清，其余步骤同HRA的检测，不显色者为吸附试验阳性。
1.3 统计学处理
根据不同材料，采用χ2检验、Yate连续性校正或Fisher精确检验法。
2 结 果
2.1 酶免疫斑点法检测心肌抗体结果：见表1。
表1 酶免疫斑点法检测心肌抗体结果
组别 例数 阳性 阴性 P1值* P2值**
例数 %
风湿性心脏病 35 23 65.7 12 ＜0.005
原发性心肌病 19 11 57.9 8 ＜0.005 ＞0.05
病毒性心脏病 18 9 50.0 9 ＜0.005 ＞0.05
缺血性心脏病 30 8 26.7 22 ＜0.01 ＜0.005
其他心脏病 16 4 25.0 12 ＜0.025 ＜0.01
正常对照组 32 0 0 32
注：*表示各心脏病组与正常对照组的比较，**表示风心病组与其余心脏病的比较
2.2 链球菌膜抗原吸附试验结果：见表2。
表2 链球菌膜抗原吸附试验的结果
组别 例数 HRA阳性
例数 HRA吸附试验 P值
阳性 阴性
例数 %
风湿性心脏病 35 23 17 73.9 6
原发性心肌病 19 11 2 18.2 9 0.003
病毒性心脏病 18 9 1 11.1 8 0.002
缺血性心脏病 30 8 0 0 8 0.001
其他心脏病 16 4 0 0 4 0.012
3 讨 论
心肌抗体是心肌受累的标志，其产生机制及临床意义尚未十分清楚，目前认为可能是在机体免疫调节失衡的情况下，各种致病因素损伤心肌导致HRA的产生，进而加剧心肌损害。本研究应用酶免疫斑点法对117例各种心脏病患者进行HRA检测，结果发现风湿性心脏病、原发[1] [2] 下一页
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