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慢性丙型肝炎患者血清病毒负荷与肝损伤及干扰素应答的关系 |
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赵西平 王宝菊 沈汉馨 郑昕 汪由坤 杨东亮 郝连杰
丙型肝炎病毒(HCV)定量检测对于研究病毒致病及机体抗病毒免疫机制，评价和指导抗 病毒治疗具有重要意义。本研究选择一组慢性丙型肝炎干扰素治疗患者对其治疗前后血清HC V含量进行检测，以评价血清病毒负荷与肝组织损伤及干扰素应答的关系。
材料和方法
一、病例及治疗
29例患者均为有输血史且血清抗HCV和HCV RNA阳性，丙氨酸转氨酶(ALT)升高，病史6个月以 上，排除乙型肝炎 及其它已知原因的慢性肝病、失代偿性肝病或肝硬化。男15例，女14例，年龄23～60(平均3 6 .5)岁。给予干扰素(Roferon,罗氏制药有限公司产品)300万或重组复合干扰素(CIFN，AMGEN 公司生 产)900万或1 500万单位肌内注射，每周3次，治疗6个月，停药后随访6个月(24周)。治疗前 行肝穿刺活 组织检查，按Knodell方法［1］计算组织活动度(HAI)，治疗及随访中定期检测血清H CV RNA和ALT。所有检查均经患者知情同意，按以上标准评价治疗结束时的近期疗效及治 疗 结束后随访6个月的远期疗效。生化应答：血清ALT恢复至正常水平；病毒应答：血清HCV RN A滴度＜1×104 拷贝/ml；完全应答：同时表现生化和病毒应答。
二、血清HCV含量检测
采用Ampilsensor荧光定量聚合酶链反应(PCR)方法［2］，AG-9600荧光定量PCR分析 检测系统和RT- Ampilsensor HCV RNA定量检测试剂盒由美国Biotronic Technologies公司生产，操作按说 明进行。为比较检测结果的可靠性，随机选择一份标本进行多复孔和稀释后检测。
三、统计学分析
采用χ2检验和相关分析。
结果
一、HCV RNA定量检测的重复性和敏感性比较
同一份标本三复孔检测，测值分别为：孔1：284×103,孔2：248×103,孔3：253×10 3 拷贝/ml，孔间差异介于3.3%～7.4%；将该标本作10倍和50倍稀释后检测，结果分别为3 2.5×103和6.12×103拷贝/ml，基本与预计值一致。
二、血清HCV定量检测结果
见表1。
表1 29例患者治疗前后血清病毒含量检测结果
(拷贝/ml)
≥1
×107 ≥1
×106 ≥1
×105 ≥1
×104 ＜1
×104 平均值(×105)
治疗前 4 7 9 9 0 55.13±116.01
治疗停止时 1 1 4 7 16 5.87±22.36
停药后24周 0 2 5 8 14 1.76±4.80
三、血清病毒含量与肝组织损伤的关系
29例患者血清ALT水平71～841(188.69±1887.72)U/L，肝组织炎症活动度指数(IAI)3～13(6 .82±2.85)，纤维化指数(FI)1～4(2.21±1.49)，总HAI为5～15(9.07±2.85)。将治疗前血 清病 毒含量进行对数转换后分析其与ALT水平、肝组织病理损伤程度结果均无明显相关(P均 ＞0.05)。
四、治疗前血清病毒负荷与干扰素应答间的关系
29例接受干扰素治疗的慢性丙型肝炎患者应答状况见表2。治疗前血清病毒含量＞106拷 贝 /ml者其近远期的生化、病毒及完全应答率均较病毒含量低于1×106拷贝/ml者低， 但均未 达到统计学意义水平；如以1×105拷贝/ml为界，则停药后24周的病毒及完 全应答率差别达到统计学意义水平，见表2。
讨论
迄今已有数种定量方法用于病毒含量的检测，包括竞争PCR，支链DNA探针检测(bDNA)系统， 结合RT-PCR检测方法等。各种方法检测结果存在一定误差［3］，我们应用Amplisen sor荧光定量PCR方法对一组慢性丙型肝炎患[1] [2] 下一页
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