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整合蛋白 5亚基表达与肝癌恶性表型 |
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r study indicated that integrin α5 subunit expression
was correlated with the growth, differentation, invasiveness, metastasis and progression of
HCC. It was possible that integrin α5 subunit is a negative regulator of these malignant phenotypes of HCC.
【Key words】 Carcinoma, hepatocellular Cell adhesion molecules
原发性肝癌侵袭转移和术后复发是临床治疗失败和病人死亡的主要原因之一。
肝癌侵袭转移是一个十分复杂的生物学现象，涉及癌细胞粘附、基质降解、细胞
迁移等许多环节。细胞粘附是其中重要步骤之一，细胞表面的众多粘附分子是细
胞粘附功能的执行者。整合蛋白是一类重要的细胞粘附分子，在肿瘤形成、生长、
分化、转移过程中起重要作用［1］。整合蛋白α5亚基与肝癌的关系国内外均未见
报道。我们采用免疫组化和Northern blot杂交研究肝癌中的表达，以探讨α5与肝
癌某些恶性表型的关系。
材料与方法
一、标本及临床资料
石蜡标本取自上海医科大学肝癌研究所存档标本，共79例。每份标本术前均
未接受化疗及介入栓塞治疗，每张切片均包括癌和癌周两部分。石蜡标本的患者
均系男性，年龄21～74岁，平均47±11岁。肿瘤平均直径6.9±3.1 cm，其中≤5 cm
有18例，＞10 cm有20例，最大直径26 cm，甲胎蛋白＞20 μg/L 51例，≤20 μg/L 28例。
合并乙型肝炎病毒(HBV)感染75例，未感染4例。所有标本均系肝细胞癌，Edmondson分级
属Ⅰ～Ⅱ级59例，Ⅲ～Ⅳ级20例；包膜完整30例，包膜不完整24例，无包膜25例。10例新
鲜标本均由液氮保存。未发生肝内转移(包括肝内播散和门静脉癌栓形成)的非侵袭性肝癌
45例，已发生肝内转移的侵袭性肝癌34例。合并肝硬化72例，小结节性肝硬化53例，大结
节性肝硬化19例。
液氮保存新鲜标本共10例，5例属非侵袭性肝癌，包膜完整、边界清晰、无肝内播散
和(或)门脉癌栓形成。另5例为侵袭性肝癌，无包膜，均发生肝内播散和(或)门脉癌栓形成。
二、方法
1.免疫组化：采用ABC法［2］，第一抗体为抗人整合蛋白α5亚基单抗，由美
国华盛顿大学郑明哲博士惠赠，ABC试剂盒为美国Vecter公司产品，华美生物
工程公司购进。
结果判断：棕黄色颗粒为阳性染色，随机选择5个高倍视野(×400)，阳性细
胞数≥5个，即为α5阳性。按此分级：(-)为无棕黄色颗粒，(+)为阳性细胞数占总
数≤10%，(++)为阳性细胞数占11%～50%，(+++)为阳性细胞占50%以上。
统计学处理：计数资料采用卡方检验，计量资料采用t检验。
2.Northern blot杂交(按分子克隆稍作修改)
探针制备：含整合蛋白α5亚基cDNA的质粒PECE，由美国La Jolla癌症研究
中心的Erkki Ruoslahti教授惠赠。碱裂解法大量制备质粒，经Sal Ⅰ、XBal Ⅱ
酶切，琼脂糖电泳鉴定，低熔点胶回收α5 cDNA，用α-32P dCTP缺口翻译法标记
探针，放射比活性1×108cpm/μgDNA。
正常肝癌组织总RNA抽提：用异硫氰酸胍法。
Northern blot杂交：取20 μgRNA，经甲醛变性电泳后转移至尼龙膜，
将膜置于预杂交液(50%甲酰胺、5×SSPE、2×Denhart液，0.1% SDS)预杂交
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