长春地区丙型肝炎病毒基因分型

    1.3  仪器  美国PE-7300荧光定量PCR，美国HBPX222U型扩增仪，fresco型低温离心机，BENQ 5000S扫描仪等。

    1.4  方法

    1.4.1  HCV-RNA定量检测  按照丙型肝炎病毒（HCV）核酸扩增（PCR）荧光定量检测试剂盒使用说明书进行操作，（1）RNA提取；（2）逆转录；（3）PCR扩增及荧光检测；（4）结果分析。抽取HCV-RNA含量≥1.0×103拷贝/ml的阳性标本进行基因分型检测。

    1.4.2  HCV基因分型检测  按照丙型肝炎病毒基因分型检测芯片说明书进行操作：（1）RNA提取与逆转录；（2）PCR扩增；（3）扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳；（4）芯片杂交与显色。

    2  结果

    2.1  HCV-RNA定量检测结果  97例抗-HCV阳性标本中HCV-RNA含量≥1.0×103拷贝/ml的标本为89例，HCV-RNA含量＜103拷贝/ml有8例，具体检测结果如表1。表1  HCV-RNA含量检测结果

    2.2  HCV基因分型检测结果  对89例HCV-RNA含量≥1.0×103拷贝/ml的标本和10例健康体检者进行基因分型检测。PCR扩增产物电泳阴性对照和阳性标本在芯片上进行杂交、显色，检测结果见图1：a为阴性，b为HCV1b型，c为HCV 2a型，d为HCV 1b/2a混合型。 荧光定量PCR检测HCV-RNA阳性的89例标本其不同基因分型具体检测结果见表2。表2  HCV基因分型结果

    3  讨论

    HCV基因型别的分布与地域有很大关系。现知欧美国家多数HCV1a型感染，而亚洲国家以1b型为主，2a型次之；3a型在泰国、新加坡较多；中东、南非和香港地区常见的基因亚型分别为4a、5a和6a；中国地区丙肝基因型以HCV1b型为主，其次为2a型，另有少量的2b型存在［2～4］。本文检测89例HCV-RNA阳性标本结果显示HCV1b型49例占55.0%，2a型37例占41.6%，1b /2a混合型3例占3.4%。说明长春地区以1b型为主，2a型次之。

    本文基因芯片法定性检测HCV-RNA与荧光定量PCR检测HCV-RNA阳性符合率为100%。10例健康对照者血清基因芯片检测结果均为阴性，阴性符合率为100%。说明基因芯片法定性检测HCV-RNA结果可靠。应用基因芯片法进行基因分型不仅具有准确性好、灵敏度高、特异性强的特点，而且简便、快速，不需荧光标记和专用的荧光扫描仪。根据文献报道［5］，HCV-RNA定量检测的阳性率比抗-HCV的阳性率高。本文结果显示：97例抗-HCV阳性标本中，HCV-RNA含量＜103拷贝/ml有8例。推测其原因为患者经过一段时期的抗病毒治疗，病毒复制减弱或停止，血中HCV- RNA病毒含量极低。

    HCV是一种全球性传染的、给人类健康带来极大威胁的病原体，是引起人类慢性肝炎、肝硬化及肝癌的主要病原之一［6］。国内外研究表明，HCV不同的基因型对肝脏损伤的程度不同，1b型对肝脏的损伤要比其他型严重得多［7］。HCV对干扰素的应答率也不同，Kandi等［8］报道HCV1b型感染多为慢性活动性肝炎，2a型比1b型对干扰素敏感。综上所述，HCV基因型与肝病严重程度有着密切关系，并且对抗病毒治疗产生很大影响。因此，HCV基因分型检测可为HCV感染者的诊断和治疗提供重要的科学依据。

【参考文献】
  1 Liew M，Erali M，Page S，et al.Hepatitis C genotyping by denaturing high-performance liquid chromatography.Clztt Microbiol

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