|
大肠癌患者基质分解素1基因表达增强 |
| |
大肠癌患者基质分解素-1基因表达增强 摘 要
目的 了解大肠癌患者癌组织中基质分解素-1基因表达情况.
方法 50例大肠癌患者术中取癌组织及正常组织；提取组织总RNA；用 共扩增逆转录定量PCR方法测定基质分解素-1基因表达水平.
结果 大肠癌组织基质分解素-1 (MMP3)的基因表达水平(1.96±0.4 4)明显高于正常大肠组织(0.43±0.12)；(P<0.001).伴有局部淋巴结转移者组织基质分 解素-1基因表达水平(3.32±0.62)明显高于无局部淋巴转移者(1.66±0.40)(P<0.01).
结论 基质分解素-1在大肠癌的浸润、转移中可能起重要作用.
主题词 结肠直肠肿瘤/病理学；基质溶解素1/遗传学；基因表达； 肿瘤转移；肿瘤侵润
张莉，秦北宁，任爱琴，张忠明，古彩吉吉，耿洪刚.大肠癌患者基质分解素- 1基因表达增强.世界华人消化杂志，2001；9(10)：1210-1212
0 引言
恶性肿瘤的浸润与转移是导致病情加重的主要原因［1-5].近年来研究表明基质金 属蛋白酶（Matrix metalloproteinases, MMPs）在肿瘤的浸润、转移中起重要作用［6 -15].基质分解素-1（Stromelysin-1, MMP3）是MMPs的一种，它在大肠癌进展中的 作用鲜有报道.我们采用逆转录共扩增定量PCR方法检测了50例大肠癌患者MMP3基因表达情况 ，现报道如下：
1 材料和方法
1.1 材料 经纤维结肠镜检察及活组织检查确诊的大肠癌患者 50例，男32例、女18例，平均年龄(56±12)岁.每例患者均在术中取癌组织一块，部分患 者在距癌肿10cm以上处取正常组织一块，迅速投入液氮，在标本留取1wk内行RNA提取.总 RNA提取试剂盒(Total RNA Isolation System)、AMV逆转录酶、RNA酶抑制剂、Olig(dt)15 Primers、 Taq酶、PCR Markers、琼脂糖均为Promega公司产品.毛细管PCR仪为美国Idaho公司产品；凝胶成像系统：Kodak digital science system DC-40.
1.2 方法 RNA提取用Promega公司生产的Total RNA Isolation System提取组织总RNA.采用分光光度法测定提取的总RNA含量及纯度，A260/A280需在1.8～2.0间.cDNA合成采用10μL逆转录反应体系；含待测RNA1μg，A MV15u，RNA酶抑制剂20u，Oligdt(15Primer) 50mg/L及适量dNTP（10mmol/L）、5×RT buff er，42℃反应1h；95℃5min灭活AMV.共扩增-PCR参照Noonan et.al 的方法进行.基质分解 素-1 (MMP3)引物的设计参照Genebank资料及王爱民et.al[16］的设计；内参对照 β-actin 的引物设计参照Genebank资料.两对引物的序列如下：
MMP3
5’ Primer(sense)5’-TAT GGA TCC CCC CCT GAC TCC CCT GAG-3’
3’ Primer(antisense)5’-ATG GAA TTC AGG TTC AAG CTT CCT GAG G-3’
β-actin
5’ primer(sense)5 -CGA GAA GAT GAC CCA GAT CA-3’
3’ Primer(antisense)5 -GAT CTT CAT GAG GTA GTC AG-3’
PCR反应体系为20μL，内含cDNA2μL，10×buffer 2μL，4×dNTP(2mmol/L)2μL，MMP3 、β-actin引物(10μmon/L)各2μL，Taq酶1U，用水补至20μL. PCR反应在0.2mL薄壁管中进行，用毛细管PCR仪扩增.PCR反应参数为：94℃预变性2min；94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸50s，30个循环；72℃后延伸7min .扩增产物在20g/L琼脂糖凝胶上进行电泳，MMP3和β-actin的扩增产物分别为194 bp和2 34 bp.对扩增产物用凝胶成像系统进行定量分析，用MMP3/β-actin的比值表示MMP3的相 对表达水[1] [2] [3] [4] 下一页
上一个医学论文： 美国护理教育的概况及启迪
下一个医学论文： 呼吸道梗阻的原因及防范措施
|
|
|
|
|
|
|
您现在的位置： 绿色健康网 >> 医学论文 >> 内科论文 >> 正文