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实验性癫痫与 氨基丁酸和谷氨酸脱羧酶的关系 |
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bsp;g，雌雄各半，随机分为：(1) 对照组(A组,8只)：腹腔注射生理盐水；(2) 癫痫发作组(B组,8只)：腹腔注射PTX 1.5 mg*kg-1*d-1，连续用20～28 d；(3) 癫痫发作间期组(C组,6只)：模型制做成功后，停用PTX 1周后采取标本；(4)：药物干预组(D组，6只)：每次在腹腔注射PTX前，腹腔注射苯巴比妥钠50 mg*kg-1*d-1，连续用20～28 d。
2. SD鼠癫痫模型的建立：按Shandra等［1］方法进行，每天上午8：30～10：00腹腔注射PTX， 连续20～28 d。癫痫发作的分级标准参照Racine［2］的方法。
3. 脑组织标本采集： 用2%戊巴比妥腹腔注射(40 mg/kg)麻醉后，按住动物于器械盘中，剪开头皮及颅骨，剥去头顶骨，用高温消毒的剪刀将整个脑组织拿出，用滤纸吸去血液，在干净的器皿中快速剪下颞区脑组织，放入冻存管，立即将冻存管置液氮中，放在-70℃冰箱内保存备用。
4. 脑组织匀浆制备：取脑组织在电子天平上称重，按1∶10(W∶V)加入预冷的脑组织匀浆液，在超声匀浆器中破碎(15 s×3)，在4℃低温离心机中15 000×g离心20 min，取上清液，置-20℃冰箱保存，3 d内进行GABA浓度和GAD活性检测。
5. 脑组织GABA浓度测定： 按Chen等［3］建立的高效液相色谱法进行检测。计算方法：外标法以峰面积定量。公式如下：
GABA浓度=(A样/A标)×标准品浓度×标准品取样量×样品总体积/样品取样量×样品重量，单位：μmol/g
6. GAD活性测定：酶反应条件按Wolf等［4］建立的方法进行。计算方法：将同一样品GAD反应后的GABA浓度减去反应前GABA浓度，就是每克脑组织所含GAD的活性，即每克脑组织在20 min内反应所生成的GABA的量(μmol/g)。
7. 统计学处理：测定数值用平均值±标准差(
±s)表示。多组样本均数间比较先用方差分析，再用q检验。如果方差不齐，先进行变量转换使方差变齐，再进行上述分析。所有数据运用SPSS统计软件包在计算机上进行分析。
结果
一、癫痫模型的观察
1.发作情况：A组无癫痫发作；B组2只为Ⅲ级发作，5只为Ⅳ级发作，1只为Ⅴ级发作；C组均达到完全点燃后(2只Ⅲ级发作，4只Ⅳ级发作)，停止注射PTX 1周；D组1只为Ⅱ级发作,其余无癫痫发作。
2. 脑电图记录：在鼠完全点燃后进行脑电图记录。用橡皮套套住鼠的4只脚，固定在木板上，再用细麻绳套住鼠牙以固定头部。用2根电极，1根插入顶部头皮下，1根插入同侧耳后皮下，在日本光电5210型10导脑电图机上描记脑电活动。可见点燃鼠脑电图上出现典型尖波和棘波发放。用同样方法记录正常对照组，未见癫痫样放电波。
二、脑组织GABA浓度和GAD活性的变化
颞区脑组织匀浆经预处理后，用高效液相色谱OPA柱前衍生法测定脑组织GABA浓度和GAD活性，计算结果见表1。
[align=center]表1 各组颞区脑组织GABA浓度和
GAD活性(
±s，μmol/g)
组别γ-氨基丁酸谷氨酸脱羧酶对照组2.15±0.377.69±2.12癫痫发作组3.82±0.81*11.85±2.56*癫痫发作间期组3.27±1.428.91±2.44药物干预组2.36±0.616.96±2.58
*癫痫发作组与对照组和药物干预组比较，P＜0.05 癫痫发作组鼠颞区脑组织GABA浓度和GAD活性较对照组增高，差异有显著意义(P＜0.05)；癫痫发作间期组鼠颞区脑组织GABA浓度和GAD活性较发作期有所下降，仍高于对照组，与对照组、癫痫发作组比较无显著差异。苯巴比妥钠干预组鼠颞区脑组织GABA浓度、GAD活性与对照组比较无显著差异。
讨论
一、PTX点燃癫痫模型
我们采用PTX腹腔注射1.5 mg*kg-1*d-1，每天上午进行。第8次注药后开始出现惊厥发作，而Shandra等在第3～5次注药后大鼠开上一页 [1] [2] [3] [4] [5] [6] 下一页
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