|
论连翘醇提物对恶性胸腹水中原代肿瘤细胞的抗肿瘤作用 |
| |
中并送至实验室。将收集的胸腹水分装至50 ml离心管中，1500 r/min离心15 min，弃上清;在15 ml离心管中将7 ml细胞悬液小心加至7 ml Ficoll之上，2200 r/min离心25 min;吸取中间层至新管;加入40 ml DHank’s液洗涤细胞;如沉淀中含有较多的红细胞，加入红细胞裂解液40 ml;用含抗生素的RPMI1640再次洗涤细胞，台盼兰染色计算细胞活力。所分离的原代细胞经病理科确诊肿瘤细胞含量>50%。
1.4 CCK8法药物敏感性测定 取1.0×105/ml上述原代细胞接种于96孔U型悬浮培养板中，加入含药物的培养液(每种浓度设立3个复孔)，并同时设立空白对照。将细胞置于37 ℃、5%CO2饱和湿度的培养箱孵育72 h后取出,每孔加入10 μl的含WST8的CCK8显色剂 (上海同仁化学研究所)，继续孵育4 h后，自动酶标仪以460 nm波长测定各孔的吸光度(A)值，用复孔吸光度平均值进行比较。肿瘤细胞抑制率=(对照孔测定A值-实验孔测定A值)/(对照孔测定A值-空白孔测定A值)×100%。以药物浓度为横坐标，存活率为纵坐标绘制浓度效应曲线，求出回归方程，得出半数抑制浓度(IC50)。
1.5 RNA提取及荧光定量逆转录聚合酶链反应(RTPCR
) 取药物作用前后的肿瘤细胞系和原代肿瘤细胞，用PBS缓冲液洗细胞1次去除培养液后，加入1 ml总RNA提取试剂TRIZOL, 充分混匀后用0.2 ml氯仿抽提，等体积异丙醇沉淀，75%乙醇洗涤RNA，空气干燥，加20 μl无RNA酶水溶解。按照逆转录试剂盒(Takara)说明书步骤将RNA逆转录为cDNA。荧光定量PCR反应体系总体积为20 μl，含SYBR green染料(Takara)10 μl(2×)，引物1 μl，cDNA 2 μl。每个基因做3个复孔。PCR扩增条件为：95 ℃ 10 s 1个循环，95 ℃ 5 s、60 ℃ 20 s 45个循环。熔融曲线反应条件为：95 ℃ 10 s，以每秒0.1 ℃ 的速度从65 ℃ 上升至95 ℃，排除非特异性扩增。软件分析其Ct值。以人总RNA(Clontech)作为校正，由公式2-(ΔCt sample ΔCt calibrator)计算凋亡抑制基因与βactin的相对定量值。
1.6 数据分析与统计 组间差异用Studentt 检验，相关性分析采用Pearsons 相关性分析，P<0.05表示差异有统计学意义。统计软件为SPSS 11.5。
2 结果
2.1 连翘醇提物对肿瘤细胞系及原代肿瘤细胞的作用 连翘醇提物对4种细胞系的生长抑制曲线见图1。连翘醇提物对细胞系的抗肿瘤作用呈浓度依赖性，对胃癌细胞株BGC823、肝癌细胞株SMMC7721、肺癌细胞株A549和大肠癌细胞株LOVO的IC50值分别为152 μg/ml、178.5 μg/ml、202 μg/ml、235 μg/ml，平均为191.88 μg/ml。在恶性胸腹水原代肿瘤细胞的研究中，连翘醇提物对原代肿瘤细胞的IC50平均值为406.13 μg/ml，与细胞系的IC50值无统计学差异，对胃癌、大肠癌、肺癌及其他消化道肿瘤来源的胸腹腔积液中原代肿瘤细胞的抗肿瘤作用无明显差异(P>0.05)。连翘醇提物对接受化疗患者的胸腹腔积液中原代肿瘤细胞的IC50值显著高于未接受化疗患者(P<0.05)，不同年龄、性别、体腔积液类型组间IC50值均无统计学差异。见表1。图1 连翘醇提物对4种细胞系的生长抑制曲线表1 连翘醇提物对25例恶性胸腹水中原代肿瘤细胞的IC50值注：同项目中不同子项间比较，*P<0.052.2 连翘醇提物与化疗药的交叉耐药特性 在收集的2上一页 [1] [2] [3] [4] [5] [6] [7] 下一页
上一个医学论文： 浅议老年心肌病心力衰竭的诊治
下一个医学论文： 对中老年2型糖尿病患者抑郁焦虑状况调查
|
|
|
|
|
|
|
您现在的位置： 绿色健康网 >> 医学论文 >> 内科论文 >> 正文