|
类风湿关节炎患者红细胞C3b受体数目改变及基因多态性分析 |
| |
而且编码C3bR的基因有一定的遗传多态性［2］。本研究旨在通过对RA患者C 3bR基因多态性和C3bR数目的对比分析，探讨C3bR数目改变的可能原因。
1 资料与方法
1.1 研究对象
RA患者共63例系我科1996年6月—1998年10月间门诊及住院患者，其中男性21例，女性42例，年龄为28.2～51.5岁，平均(40.2± 8.4)岁。RA的诊断依据美国风湿病协会1987年制定的标准［3］。另有60名作为正常 对照组，系健康献血员，年龄为26.5～48.6岁，平均(37.6±7.8)岁，男女各30名。所 有被观察对象均抽取外周抗凝血2 ml，－20 ℃保存备用。
1.2 实验方法
1.2.1 红细胞C3b受体花环率(C3bRR)及免疫复合物花环率(C3bICR) 测定：参照文献［4］进行。
1.2.2 基因组DNA提取：抗凝血加红细胞裂解液混匀后，2 500 r/min离心10分钟，沉淀 物为白细胞，经缓冲液悬浮及蛋白酶K作用后，采用酚/氯仿/异戊醇法提取外周血白细胞基 因组DNA，透析法纯化DNA，紫外分光光度计检测光吸收度A260/A280 ，并且两者比值大于1.6。DNA浓度调整至0.5 mg/L左右。
1.2.3 基因组DNA的限制性酶切：酶切反应体系体积为30 μl。在50 μl Eppendorf管中 分别加入基因组DNA 20 μl，双蒸去离子水5 μl，10×Buffer 3 μl，限制性内切酶HindI II(1×107 U/L)2 μl，12 000 g离心5秒，37 ℃水浴保温过夜后，加入1/5体积的0.5 m ol EDTA终止反应。取适量酶切DNA产物于0.8%琼脂糖凝胶中电泳。
1.2.4 酶切片段的Southern blotting分析及显影：首先采用缺口平移法对C3bR c DNA探针行32P标记。探针由美国哈佛大学医学院Klickstein博士赠送。cDNA全长0.8 kb，位于PBR 322质粒载体中。然后将电泳后的凝胶以毛细管转移法转移至尼龙膜上，80 ℃烤1小时以固定DNA。尼龙膜先以42℃水浴摇床预杂交4小时，再以32P标记的cDNA探 针42 ℃水浴摇床杂交12小时，64 ℃条件下进行特异性洗膜。杂交膜最后以－75 ℃曝光24 小时显影。放射自显影结果显示6.9 kb和7.4 kb两种带型［5］，分别代表C3b R基因存在两个等位基因，并计算等位基因基因型和表现型的频率。
1.3 统计学处理
两个均数间的比较用t检验，两个率的比较用χ2检验。
2 结 果
2.1 RA患者红细胞C3b-RR，C3b-ICR的改变见表1。表1结果显示，RA 患者红细胞C3b-RR显著低于正常对照组(P＜0.05)，而红细胞C3b-ICR 则明显高于正常对照组(P＜0.01)。
表1 RA患者红细胞C3b-RR，C3b -ICR的改变(±s)
组别 n C3b-RR C3b-ICR
RA组 63 14.38±3.761) 18.73±10.292)
对照组 60 20.64±5.21 9.74±2.98
注：1)与对照组相比P＜0.05
2)与对照组相比P＜0.01
2.2 RA患者红细胞C3bR基因的限制性片段长度多态性(RFLP)分析：C3bR基因的两个等位基因，其基因型、表现型频率在RA患者及正常对照组中的频率见表2。表2可见， C3bR基因的两个等位基因基因型和表现型频率在RA组和对照组均无显著差异(P均 ＞0.05)。
表2 RA患者红细胞C3bR等位基因基因型和表现型频率(%)
限制性片段长度(kb) RA组(n＝63) 对照组(n＝60)
基因型 6.9 22 24
7.4 59 53
表现型 76.9/7.4 18 17
7.4/7.4 41 36
上一页 [1] [2]
上一个医学论文： 原发性干燥综合征死亡原因及相关因素分析
下一个医学论文： Degos病一例并文献复习
|
|
|
|
|
|
|
您现在的位置： 绿色健康网 >> 医学论文 >> 内科论文 >> 正文