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Wegener肉芽肿病CD4 CD28 T细胞的免疫表型及功能的研究 |
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0 or anti-CD86 monoclonal antibodies.In add ition,the levels of IFN-γ produced by CD4＋CD28－-T cells were significan tly higher than CD4＋CD28＋-T cells did.Finally,CD4＋CD28－-T cells we re able to act as APC in anti-CD3-induced T cell proliferation,this may be due to the cells expressed enhanced levels of CosM ligand CD86 which provide them w ith APC properties.Conclusion These data indicate that in WG in creased CD4＋CD28－-T cells are a subset of in vivo activated autoreact ive T cells,which mainly produce Th1-type cytokine and could act as non-prof essional APC.The activation and proliferation of CD4＋CD28－-T cells are in dependent of CD28/CTLA-4-CD80/CD86 pathway.
【Key words】 Wegener′s granulomatosis Costimulatory molecu les T Lymphocyte subsets Immunophenotyping
Wegener肉芽肿病(WG)是一种病因不明的血管坏死性、肉芽肿炎性疾病。近年来发现T细胞在其发病机制中起重要作用［1～4］。T细胞活化需要二种信号：第一信号为抗原特异性信号，即T细胞受体识别抗原提呈细胞(APC)表面的MHC-抗原复合物，第二信号为非特异性的，即共同刺激信号(costimulatory signals，CosS)［5，6］。现了解最多 的也是最重要的CosS是CD28/CTLA-4-CD80/CD86系统，即T细胞表达的CD28和CTLA-4(CD15 2)与APC表达的CD80或CD86结合。静止及活化的T细胞均表达CD28，而只有活化的T细胞表达 CTLA-4。大部分静止的APC不表达CD80，但表达少量的CD86，活化后两者的表达均增加。另 外，活化的T细胞也可表达一定量的CD80及CD86［5～7］。
CosS在自身免疫反应及自身免疫病中起极为重要的作用，现已证明SLE、RA及艾滋病均存在C osS表达及调节的异常［8～11］。为了解CosS在WG中的作用，本文测定分析了CosM在 WG外周血淋巴细胞的表达和CD4＋CD28－-T细胞的免疫表型特征及功能。
1 资料与方法
1.1 病例选择
WG患者26例，均为Lbeck大学风湿病医院住院患者。WG的诊断符合美国风湿病学会1990年 的分类标准［12］。其中21例为系统型病变(多脏器受累)，另5例为只有呼吸道受累的局限型；有16例为活动期，10例为缓解期，6例未用免疫抑制剂治疗，另外20例分别接受不同剂量的强的松、环磷酰胺或甲氨蝶呤治疗。所有患者均为胞浆型抗中性粒细胞浆抗体阳 性。与WG性别、年龄相匹配的正常对照者20名，均为健康的献血者。
1.2 细胞的分离与纯化
1.2.1 CD4＋T细胞：方法见参考文献［2］。
1.2.2 CD4＋CD28－及CD4＋CD28＋T细胞：将单核细胞与phycoerythrin (PE)标 记的抗CD4＋及Fluorescein-isothio-cyanate(FITC)标记的抗CD28MoAb室温共同孵育半 小时，经PBS洗涤2次后用流式细胞仪细胞分类器(EPICS 752，Coulter)将细胞进行分类收集 ，得到CD4＋CD28－及CD4＋CD28＋T细胞，纯度分别＞97%和＞95%。
1.2.3 APC：将单核细胞与M450Pan-T CD2(Dynal公司)于4 ℃共同孵育1小时后用磁分 离器除去与磁珠结合的CD2＋细胞，得到APC［主要为B细胞和单个核细胞(monocytes)］， 其CD3＋细胞＜1%。
1.3 FACS免疫表型分析
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