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类风湿关节炎血清学早期诊断 |
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RA早期诊断的举措，使病人能得到及时诊断和治疗，从而改善病人的预后。
1 资料与方法
1.1 研究对象
116例诊断未肯定的关节痛/关节炎患者为1996年至1998年5月北京协和医院门诊或住院病人 ，多为初发病者，有大小关节疼痛和/或肿胀，其中病期多不足1年，不能全部符合1987年AC R的RA分类诊断标准和其他风湿病的常用诊断标准。其中男性29例，女性87例，男女比例1∶ 3，最大年龄73岁，最小年龄16岁，并对这些病人进行长期随访观察。
1.2 方法
1.2.1 APF检测：我们结合Hoet［3］和Sondag-Schroots［4］方法对APF 进行检测，简述如下，清洁口腔，取颊粘膜脱落细胞，用PBS漂洗3次，其中第2次加入10 ml 含0.5% Triton-X 100的PBS处置10分钟。调整细胞数至1×108/L，滴至载玻片，风干后 备用。1∶20稀释血清，用间接免疫荧光法检测。判断标准：全片出现2个以上细胞中出现典 型的核周均质圆形荧光颗粒为阳性。
1.2.2 AKA检测：采用间接免疫荧光法［5，6］，简述如下，取6周龄雄性Wistar 大鼠的中1/3食道作为抗原，冰冻切片，厚度5 μm，－70 ℃保存备用。结果判定标准：典 型的角质层板层状、线状沉积的荧光为阳性。
1.2.3 Sa抗原的制备及其抗体的检测：采用Despres等［7］的方法，简述如下， 取100 g新鲜的人胎盘组织，匀浆，低温高速离心机4 ℃ 10 000 r/min离心60分钟，取上清 。上清液与DE 52混合，搅拌60分钟，抽滤并用匀浆缓冲液洗涤。将DE 52与300 ml洗脱液A 混合，搅拌60分钟，用700 ml洗脱液A洗涤，弃滤液。DE 52再与300 ml洗脱液B在混合，搅 拌60分钟，抽滤，并用150 ml洗脱液B洗涤，收集滤液。用含0.15 mmol/L PEMSF的蒸馏水 透析24～36小时后冷冻干燥(以上操作均在4 ℃条件下进行)。用免疫印迹法检测，选用5%浓 缩胶、10%分离胶，电泳，样品入浓缩胶前5 mA，进入浓缩胶后提高至10 mA，样品进入分离 胶后改为15 mA。电泳后将抗原转印至硝酸纤维膜上，先后加血清、辣根过氧化物酶标记的 羊抗人IgG抗体和底物液显色。凡在蛋白质分子量为50 000和/或55 000区带出现条带者为阳 性，阳性血清由加拿大Menard教授提供。
1.2.4 RA33/36抗原的制备及其抗体的检测：用Ehrlich腹水癌细胞提取的抗原检测抗RA 33/36抗体［8］。简述如下，A型玻璃匀浆器破坏细胞膜，保存细胞核，750 g离心5 分钟，取沉淀，弃上清。加入4 ml核悬浮(10 mmol/L pH 7.9 HEPES-KOH缓冲液含有2.5 mmol/L MgCl 25%甘油)，搅拌30分钟，加入4 ml破核液(10 mmol/L pH 7.9 HEPES-KOH缓 冲液含有0.88 mmol/L NH4Cl)搅拌30分钟，50 000 g离心20分钟，取上清，弃沉淀 。上清液透析24～48小时，分装，－80 ℃冰箱保存。选用5%浓缩胶，12%分离胶电泳，样品 入浓缩胶前5 mA，进入浓缩胶后提高电流至10 mA，样品进入分离胶后改电流15 mA。电泳结 束后，将抗原转印在硝酸纤维膜上。先后加血清、辣根过氧化物酶标记的羊抗人IgG抗体和 底物液显色。凡在蛋白质分子量为33 000和/或36 000区带出现条带者为阳性。标准阳 性血清由奥地利Smolen教授提供。
2 结 果
我们对随访中的116例诊断未明的关节痛/关节炎患者的APF、AKA、抗Sa抗体和抗RA33/66抗 体阳性和阴性的转归分别进行了分析(见表1、第210页表2)。这些病人经4～18个月随访后， APF阳性的29例中有20例(69%)最后确诊为RA，尚无1例诊断为其他疾病。87例APF阴性患者16 例(18.9%)确诊为RA，1例确诊为SLE，9例确诊SS，6例确诊为OA，确诊为其他疾病的5例。A KA 30例阳性患者中，16例(53.3%)确诊为RA，1例确诊为SS，确诊其他疾病1例。87例AKA阴 性患者中，18例(21.7%)确诊为RA，1例确诊为SLE，9例确诊为SS，6例确诊为OA，确诊为其 他疾病的5例。抗Sa抗体39例阳性患者19例确诊为RA，占48.7%，2例确诊为SS，2例确诊为 其他疾病。76例抗Sa抗体阴性患者17例(22.4%)确诊为RA，1例确诊为SLE，8例确诊为SS，6 例确诊为OA，确诊为其他疾病的4例。对A上一页 [1] [2] [3] 下一页
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