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甾体5 |
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察到空白对照组的NADPH含量轻微地直线下降，实验组中实测数据扣除这种下降率后才为真实结果。
该方法与国内外一般所采用的同位素法相比较为简便快捷、准确可靠。实施同位素测定方法过程中〔11〕，除了本实验步骤外，尚需将T进行同位素标记，孵育后进行薄板层析及刮板后作同位素计数，步骤多耗时长，相反本实验方法则简便快捷易操作。另外，诸如同位素标定和测定时、层析板处理过程中随机测量误差及系统误差难以避免。在简单的酶反应中，产物的生成速率应该等于底物的分解速率〔8〕。同位素法在37℃孵育30min终止反应后进行产物〔3H〕-DHT测定，求其平均生成速率，以代表酶的活性，实际上是一个30min内的平均概念，不是酶学反应的初速率。而分光光度计法连续测定反应体系中NADPH在反应初始10min内的下降速率，通过直线回归计算出底物NADPH的分解速率，更贴近酶学反应的初速率，即酶活性。反应的起始10min的线型几乎是直线，而30min内的线型已经是曲线了。因此，分光光度计法更准确可靠。
将两种方法进行比较，同位素法所用试剂除了分光光度计法所用的之外，尚需将T进行同位素标记，还有薄板层析及同位素计数时所需的一系列试剂和设备，无形中增加了实验成本。不仅费用高，而且需要测定仪器精确，复杂的操作程序需要精良的技术。所以，分光光度计法显得较为经济实用。
本实验方法可以进一步发展为治疗BPH药物甾体5α-还原酶抑制剂的体外筛选模型。
作者单位：200031 中国科学院上海药物研究所新药研究国家重点实验室；*现在中国科学院上海细胞生物学研究所
参 考 文 献
1 Boudon C, Lumbroso S, Lobaccaro JM, et al. Molecular study of the 5α-reductase type 2 gene in three European families with 5α-reductase deficiency. J Clin Endocrinol Metab, 1995,80:2149.
2 Metcalf BW, Holt DA, Levy MA, et al. Potent inhibition of human steroid 5α-reductase (EC 1.3,1.30) by 3-androstene-3-carboxylic acids. Bioorg Chem, 1989,17:372.
3 崔毓桂. 类固醇5α-还原酶与5α-还原酶缺陷症. 《国外医学》内分泌学分册. 1995，15(1)：4.
4 Tenover JS. Prostates, pates, and pimples: the potential medical uses of steroid 5α-reductase inhibitors. Endocrinol Metab Clin North Am, 1991,20:893.
5 Horton R. Editorial: benign prostatic hyperplasia: new insights. J Clin Endocrinol Metab, 1995,74:504A.
6 Celler J. Therapeutic controversies: clinical treatment of benign prostatic hyperplasia. J Clin Endocrinol Metab, 1995,80:745.
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