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逆转录病毒感染与类风湿关节炎的相关性研究 |
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L，TNF 100 kU/L，PHA 5 mg/L)，调至细胞浓度为(1～2)×109/L，于37 ℃细胞培养箱培养72小时，500 g离心测定HTLV-Ⅰ相关抗原及RT活性，并继续培养至2周。
1.2.2 HTLV-Ⅰ相关抗原测定：应用直接免疫金银染色法测定HTLV-Ⅰ相关抗原〔1〕。细胞涂片干燥后，1%戊二醛固定5分钟，PBS液(含Tween-20，pH7.4)冲洗3次，每次各5分钟，封闭液(含1%小牛血清白蛋白)封闭10分钟，加入经适量稀释的免疫金探针，37 ℃反应2小时，用PBS液和双蒸水冲洗后，显影液显影3分钟～7分钟，甲基绿复染，光镜下观察结果。HTLV-Ⅰ抗血清：日本成人T细胞白血病患者HTLV-Ⅰ抗体阳性血清，效价为1∶1 280，由日本九洲大学医学部赠送。
1.2.3 逆转录酶(RT)活性测定：参照Porstmann等〔2〕人方法测定RT活性。结果用A值表示(A＝492 nm)。阴性对照为正常人经PHA刺激后外周血(A≤0.2 nm)。
1.2.4 合胞体形成试验：在细胞培养的1天～14天期间，间隔取样涂片，因定，瑞氏-姬姆萨染色后光镜下观察。细胞涂片中一出现自发性合胞体(细胞中含有3个或3个以上细胞核)即定为阳性。持续观察至2周。
1.3 统计学处理
阳性率比较采用χ2检验，相关性采用线性相关分析，P＜0.05为显著性差异。
2 结 果
2.1 HTLV-Ⅰ相关抗原测定：直接免疫金银染色法检测33例RA样本和20例健康对照样本的HTLV-Ⅰ相关抗原表达。在33例RA样本中，有25例检测到HTLV-Ⅰ相关抗原表达，阳性率为75.8%，而20例健康对照样本均未检测到HTLV-Ⅰ相关抗原表达(见图1)。统计分析示RA病例组和健康对照组在HTLV-Ⅰ相关抗原的表达上呈极显著差异(χ2＝25.720，P＜0.001)。另外，统计分析患者病程与HTLV-Ⅰ相关抗原表达的关系，发现两者之间不存在相关性(P＞0.05)。
2.2 RT活性测定：为进一步确证逆转录病毒抗原的存在，对12例RA样本进行逆转录病毒特有的RT活性测定。结果发现HTLV-Ⅰ相关抗原阳性标本同时表达RT活性强度，且其活性随抗原表达程度增高而增高，两组之间呈线性正相关(r＝0.971 8，P＜0.001，Spearman方法)。
2.3 自发性合胞体形成：在细胞培养的1天～14天中，33例RA样本中12例可见到自发性合胞体形成，阳性率为36.4%，而20例健康对照组中未观察到类似现象，两组之间呈显著性差异(χ2＝7.439，P＜0.01)。这些自发性合胞体多在培养后第3天～5天出现，不久便消失。自发性合胞体外形呈圆形或椭圆形，直径比周围细胞大3倍～5倍，胞膜光滑，胞内可见多个核聚在细胞中央。为进一步明确自发性合胞体形成的意义，对RA标本进行统计分析，发现25例HTLV-Ⅰ相关抗原阳性的标本中有12例出现自发性合胞体，而8例HTLV-Ⅰ相关抗原阴性的标本无一例出现类似现象(χ2＝4.138，P＜0.05)。结果表明HTLV-Ⅰ相关抗原表达与自发性合胞体形成之间有联系。
3 讨 论
近年来国外报道HTLV-Ⅰ感染患者多出现RA样关节炎表现，推测关节病变是由HTLV-Ⅰ诱发滑膜组织过度增殖所致〔3〕。1996年日本学者在HTLV-Ⅰ流行区调查7 087名居民。其中HTLV-Ⅰ携带者的RA患病率为0.56%，而非携带者的患病率为0.31%(P＜0.05)〔4〕。由此推测逆转录病毒有致RA病变作用，但RA的发病是否由逆转录病毒诱发所致，目前尚缺乏确切证据。
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