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氨基胍对糖尿病大鼠肾组织中糖化终产物受体mRNA表达的调节 |
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er GHb level (diabetes vs control: 7.71%±0.22% vs 2.95%±0.52%, P＜0.001). AG treatment for 8 weeks lowered GHb levels by 26.72% (P＜0.05). Conclusion The excessive gene expression of RAGE in renal tissue of diabetic rats might occur as a result of hyperglycemia-induced AGEs formation and the decrease of AGEs level by AG therapy attenuated the abnormal RAGE gene expression pattern which could contribute to preventing renal damage from AGEs accumulation.
【Key words】 Aminoguanidine Diabetes mellitus Renal tissue RAGE mRNA
(Chin J Endocrinol Metab, 1999,15:27-30)
葡萄糖通过非酶促糖化的方式与蛋白质或氨基酸的氨基结合，先形成醛胺类产物，即Amadori产物，进而形成中、晚期糖化产物(AGEs)〔1〕。研究表明，AGEs蓄积与糖尿病肾病的发生和发展密切相关。氨基胍，作为AGEs形成的抑制剂，在动物模型中对糖尿病相关的多脏器损伤(包括糖尿病肾病)有效的干预作用，使得AGEs蓄积在糖尿病肾病发病中的意义更为人们所重视〔2〕。现已发现，AGEs与细胞表面特异性受体(Receptor for AGEs, RAGE)的相互作用是其致病的关键途径〔3〕，氨基胍对此有否影响，报道甚少。因此，本文以链脲佐菌素诱发的糖尿病大鼠为模型，对应用氨基胍后肾组织内RAGE mRNA表达的改变进行研究。
材料和方法
一、动物模型的建立与分组
雄性SD大鼠，2月龄，体重180～220g，由上海医科大学放射医学研究所动物中心提供，随机分为正常对照组(C1，11只)，正常对照加氨基胍治疗组(C2，11只)，糖尿病对照组(D，11只)及糖尿病给予氨基胍治疗组(DT，11只)。糖尿病大鼠按65mg/kg体重腹腔注射链脲佐菌素(STZ，购自Sigma公司，溶解于0.1mol/L柠檬酸钠缓冲液中pH4.5)，依据注射后48小时尿糖为()～()，尾静脉采血测血糖(One Touch II血糖仪)，血糖≥16.7mmol/L者，确定模型建立并纳入本实验。自注射后第3天起D组与DT组均用长效胰岛素2U隔日皮下注射。
二、给药方法
氨基胍治疗组大鼠饮含氨基胍的自来水(1g氨基胍溶解于1L饮水中〔4〕，相当于50mg*kg-1*d-1，盐酸氨基胍购自Sigma公司)，连续给药8周，实验第4周末和第8周末，分两批处死大鼠取材。
三、检测指标及方法
每4周用大鼠代谢笼收集所有大鼠的24小时尿标本，计量后-80℃保存，作尿蛋白和尿肌酐(Cr)测定(尿蛋白测定用comassie亮蓝法，尿肌酐测定用碱性苦味酸法)。四组大鼠分别于病程的第4、8周末，腹腔注射戊巴比妥钠(40mg/kg)麻醉后，由股静脉抽血4～6ml，分别留取1ml经EDTA抗凝，测定糖化血红蛋白(GHb)(微柱法，GHb测定微柱购自宁波市慈城生化试剂厂)，4ml非抗凝血经离心管吸取血清，测定血尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、葡萄糖(Glu)(用自动生化分析仪测定)，参照有关公式计算内生肌酐清除率(Ccr)。采血后立即游离肾脏，微分离皮、髓质进行RT-PCR分析。
总RNA提取采用异硫氰酸胍-苯酚-氯仿一步抽提法〔5〕，用紫外分光光度计(DU-7型，Beckman公司)以及电泳分析确定RNA的量和纯度。所用RNA的A260/A280在1.8～2.0之间，经电泳每组均可见18S和28S两条较深的电泳条带。
取5μg总RNA，采用逆转录试剂盒(Promega公司)，以Oligo (dT)15为引物合成cDNA，反应总体积为10μl。RAGE和GAPDH的PCR引物分别依据1996年文献〔6〕报道的序列应用DNA合成仪合成，其序列分别为RAGE：引物1(反义链)，5’CACGCTTCGGTCAGAG上一页 [1] [2] [3] 下一页
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