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胸腺素 原对老龄鼠免疫功能的调节 |
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〔2〕；②作为胸腺肽调节机体免疫功能〔3〕。本实验以老龄鼠为模型，通过腹腔注射ProT α及体外细胞培养技术，了解ProT α对老龄鼠甲状腺激素的分泌及免疫功能的调节作用，从而探讨ProT α在神经内分泌免疫网络中的作用及可望提高老年人生活质量的应用前景。
材料与方法
一、主要试剂和仪器
胎牛血清为天津生化制品厂产品。MTT为Fluka产品。RPMI 1640为美国Gibco公司产品。ProT α由本室制备〔4〕。T3、T4、TSH放射免疫分析测定药盒购自北京北方生物技术研究所。15月龄雌性昆明种小鼠，由我院动物中心提供。
DG-3022A型酶联免疫检测仪为南京华仪达电子服务有限公司产品。MH-02型自动放射免疫γ计数器购自北京民华科技服务公司。CO2孵箱为美国NAPCO公司产品。岛津UV-120-02分光光度计系日本岛津制作所产品。
二、实验动物及处理方法
取体重在40～50克之间的老龄小鼠随机分两组：一组用药物处理，腹腔注射ProT α，300ng/d；另一组作对照，腹腔注射同体积的生理盐水。于第17天腹腔注射浓度为2×1010/ml的新鲜绵羊红细胞，4ml/kg。再过4天，眼球采血测血清T3、T4、TSH及溶血素水平；称小鼠脾脏及胸腺的重量，分别计算其相应指数；并测定脾脏中抗体形成细胞(PFC)水平。
脾脏或胸腺指数=脾脏或胸腺的重量/该鼠的体重×100
三、血清溶血素的检测〔5〕
取经生理盐水稀释500倍的上述血清样品1ml，加至反应管，再加入浓度为2×1010/ml的绵羊红细胞0.5ml。置冰浴中冷却，于每管加入1ml补体(以生理盐水1:10稀释过的豚鼠血清)，将反应管移至37℃恒温水浴中，保温10分钟后，将管立即移入冰浴中，以终止反应。将反应管离心2 000rpm 10分钟，取离心后所得的上清液1ml及3ml都氏试剂，置于试管内充分混匀，放置10分钟后，于540nm比色。同时以生理盐水代替血清样品做空白对照，并测定实验用的羊红血球半数溶血时的吸收度值，其方法是：取0.25ml绵羊红细胞，加都氏试剂至4ml，摇匀，放置10分钟，在分光光度计上测A540，该值即为试验中所用羊红血球半数溶血时的吸收度值。按下列公式计算每只小鼠样品半数溶血值(HC50)。
四、PFC的检测〔6〕
常规制备脾单细胞悬液〔7〕，并用含10%胎牛血清的RPMI 1640应用液调整细胞浓度为2×107/ml。以pH7.2的PBS液为介质，在试管中分别加入脾细胞悬液1ml(对照用PBS 1ml代替)、体积分数为0.2% 绵羊红细胞1ml、1:10补体1ml，充分混匀，置37℃孵育1小时。然后，离心3000rpm 5分钟，用分光光度计测A413。
五、体外淋巴细胞转化
同上法无菌制备小鼠脾细胞悬液，其浓度为1×107/ml。将此悬液加至96孔细胞培养板中，每孔100μl。然后，每孔再加入不同的药物进行处理，使总体积达200μl，并设立对照。置37℃，湿度饱和的5% CO2孵箱培养70小时。轻轻吸弃上清100μl，加入浓度为5μg/ml的MTT溶液10μl，于振荡器上振荡1分钟后再培养2小时。取出反应物，离心2000rpm 5分钟，吸弃上清，每孔加入二甲亚砜150μl，振荡5分钟，在酶标仪上测定A570。
六、血清T3、T4、TSH的测定
严格按说明书进行操作。
七、统计分析
数据用±s表示，采用两样本均数t检验。
结 果
一、ProT α对老龄鼠胸腺及脾脏指数的影响(表1)。与对照组相比，老龄小鼠经腹腔注射ProT α以后，其胸腺、脾脏指数均明显升高，P＜0.01。
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