|
猪源杀菌性 通透性增加蛋白对革兰阴性菌的作用 |
| |
周红 郑江 肖光夏
杀菌性/通透性增加蛋白(Bactericidal/permeability increasing protein, BPI)是一种存在于人及哺乳动物中性粒细胞(PMN)嗜天青颗粒中的蛋白质，相对分子质量约为55 000，具有特异杀死革兰阴性(G-)菌及中和内毒素的作用。我们已成功地从猪PMN中提取纯化BPI，并对其体内外生物活性进行了研究。现将其对革兰阴性菌的杀菌作用作一报道。
材料与方法
一、实验材料
(一) 细菌 大肠杆菌、绿脓杆菌等均为我室分离并鉴定。
(二) 放线菌素D(Act D) Fluka产品。
(三) 3H-亮氨酸 中国原子能研究所产品。
(四) 猪源BPI 由我室按照Weiss的方法提取并纯化［1］。
二、实验方法
(一) 猪源BPI对G-菌杀菌活性的测定 将细菌培养至对数生长期，吸取0.4ml菌液(9×107cfu/ ml)，加入一定量纯化的猪源BPI， 37°C培养30分钟后，梯度稀释后进行菌落计数。
(二) 半乳糖对猪源BPI杀灭J5菌作用的影响 将J5菌接种于含有5mmol/L半乳糖及无半乳糖的TEM培养液中，37°C振荡培养18小时后，再转移至新鲜培养液中4小时，吸取0.4ml菌液(9×107cfu/ ml)，加入BPI 1μg,37°C温育30分钟后，梯度稀释后进行菌落计数。
(三) 猪源BPI增加G-菌外膜通透性能力的测定 利用细菌对Act D的不通透性，测定在BPI存在与不存在情况下，Act D对3H亮氨酸的掺入情况的影响。
(四) 猪源BPI对J5菌形态学的影响 将J5菌接种于无半乳糖的TEM培养液中，按方法1中所述进行BPI杀菌实验。常规方法收集菌体并制作透射电镜标本，菲利浦透射电镜观察并拍照。
三、统计分析
t检验方法进行均数比较。
结果
一、猪源BPI对G-菌杀菌活性及通透性增加能力的测定
猪源BPI具有强大的杀灭G-菌作用和增加G-菌外膜通透性的能力，对G+菌无影响，见表1。
表1 各种细菌对BPI的敏感性
细菌 增加通
透性活性 杀菌活性
革兰阴性菌
大肠杆菌 ++++～++ ++++～++
痢疾杆菌 ++ ++
绿脓杆菌 ++++～++ ++++～++
沙雷氏菌 ++++～+++ ++++～+++
肺炎杆菌 ++++～+++ ++++～+++
阴沟杆菌 +++ +++
革兰阳性菌
金黄色葡
萄球菌 — 0
表皮葡
萄球菌 — 0
链球菌 — 0
注：1～4+表示BPI产生>90%杀菌或增加通透性活性的蛋白质用量；++++：<1μg,+++:1～2.5μg,++:2.5～5μg,+：5～10μg,0:>20μg无效；—：表明该菌对放线菌素D敏感
二、半乳糖对猪源BPI杀灭J5菌作用的影响
在无半乳糖TEM培养液中生长的J5菌对BPI敏感，BPI杀菌率为84.3%，而在有半乳糖培养液中生长的J5菌对BPI较不敏感，BPI杀菌率为14%。
三、猪源BPI对J5菌形态的影响
在透射电镜下观察，正常J5菌形态完整，细菌内外膜清晰、完整，胞质成份均匀。而当加入猪源BPI 30分钟后，细菌外膜破碎，胞质浊化甚至流出，细菌周围出现碎片。
讨论
猪源BPI对许多G-菌具有增加其外膜通透性并将之杀灭的作用，其中包括大肠杆菌、绿脓杆菌、沙雷菌等，而对G+菌无此作用，说明BPI特异地作用于G-菌。但各种菌之间乃至同种细菌之间对BPI的敏感性不同。这与文献报告的人源、兔源BPI的作用相似［1，2］。关于BPI的杀菌机制目前尚不清楚。但从对猪源BPI的杀菌性和通透性增加能力测定中可看出：细菌对BPI的杀菌力和通透性增加能力的敏感性是同步的，所需BPI的剂量相同，说明BPI的杀菌活[1] [2] 下一页
上一个医学论文： 病毒性肝炎患者血清 型胶原水平变化与意义
下一个医学论文： 应激性胃肠粘膜病变对急性脑卒中预后的影响
|
|
|
|
|
|
|
您现在的位置： 绿色健康网 >> 医学论文 >> 内科论文 >> 正文