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血清乙型肝炎病毒核酸定量检测与临床关系 |
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杨湛 黄海 冼超
在乙型肝炎病毒(HBV)慢性感染过程中，病毒量在病程中的变化规律一直为人们关注。近年建立的定量PCR方法，为定量观察病毒提供了一个灵敏的指标。采用这一方法，我们动态观察了32例慢性乙型肝炎(乙肝)患者自然病程中血清HBV DNA拷贝数与肝功能、临床类型及在重叠感染时的关系，现将结果报告如下。
材料和方法
一、病例选择与病原学诊断标准
全部病例为1996年2月至5月本院住院患者，共32例，男28例，女4例；年龄12～51岁，平均32.6岁。所有患者HBsAg阳性，病程在6个月以上。按照1995年第五次全国传染与寄生虫病学术会议修订的诊断标准，其中符合病毒性肝炎慢性轻度6例，中度22例，重度4例。入院后重复2次检测有抗-HAV-IgM(+)，或抗-HCV(+)和HCV RNA(+)(PCR法)；或抗-HDV-IgM(+)；或抗-HEV-IgM/IgG(+)者，分别诊断为乙肝重叠甲、丙、丁、戊肝。32例中乙肝单独感染22例(68.8%)，乙肝与其它肝炎病毒重叠感染10例(31.3%)，其中乙+戊5例，乙+丙3例，乙+丁+甲2例。
二、检测方法
(一) 肝炎病毒抗体检测 均采用EIA方法。抗-HCV试剂盒购自天津普生科技有限公司；抗-HAV-IgM、抗-HDV-IgM、HBsAg试剂盒购自珠海丽珠生物技术公司；抗-HEV-IgM/IgG试剂盒购自美国Genelabs公司。每份标本均经2次阳性后确认。
(二) HCV RNA检测 采用RT-PCR，试剂盒购自中国军事医学科学院。
(三) HBV DNA定量检测 血清样本提取核酸模板，然后以定量PCR检测HBV DNA拷贝数，具体方法见文献［1］。入院时及每2周检测1次，直至ALT恢复正常。
(四) 肝功能检测 采用全自动生化分析仪，入院时及每2周检测1次，直至ALT恢复正常。
三、治疗
每日静脉滴注复方丹参、肝安等，口服常规护肝药物，未使用抗病毒药及降酶药。
结果
一、治疗前后血清HBV DNA拷贝数和ALT的关系
见表1。
表1 HBV DNA拷贝数
与ALT的关系()
项目 HBV DNA
(E拷贝/μl) ALT(U/L)
治疗前 3.38±1.72 863±112
治疗后 1.83±1.94* 51±13
*:与治疗前比较P<0.01
二、HBV单独感染与重叠感染血清HBV DNA定量检测结果
见图1。治疗前两组间HBV DNA拷贝数无差异，治疗后两组比较差异有显著性。
图1 HBV单独感染与混合感染组血清HBV DNA定量检测结果
三、轻、中、重度组血清HBV DNA定量检测结果
见图2。治疗前轻、重组间HBV DNA拷贝数差异有显著性，而轻、中组间和中、重组间比较差异无显著性。治疗后三组之间差异无显著性。
图2 轻、中、重度慢乙肝患者血清HBV DNA定量检测结果
讨论
慢性乙肝病程迁延，了解这一过程中病毒量的变化与临床的关系，对深入研究乙肝的临床过程和指导治疗有重要意义。本研究采用定量PCR方法检测血清中HBV拷贝数，结果32例患者中最高为每微升血清106.4拷贝(6.4E拷贝/μl)，5例阴性。全部病例若按>4E拷贝/μl、2～4E拷贝/μl、<2E拷贝/μl等将病毒量分为高、中、低三度，则高滴度占26.0%，中等滴度占62.9%，低滴度占11.2%。治疗前，ALT在最高值时HBV DNA平均值为(3.38±1.72)E拷贝/μl，治疗后，ALT恢复正常或接近正常时，HBV DNA平均值降至(1.83±1.94)E拷贝/μl。两者相比，差异有显著性。进一步分析HBV DNA与ALT的伴随关系，每2周1次追踪检测资料显示82.1%患者两者升降趋势一致或基本一致。以上结果提示大多数患者血清病毒水平并非衡定不变，而是随肝脏炎症情况波动，恢复期病毒减少，应是患者自身免疫系统[1] [2] 下一页
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